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目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对胃癌细胞系MGC803细胞RECK基因甲基化及其mRNA表达水平的影响,并探讨核因子κB(NF-κB)在EGCG诱导RECK mRNA表达中的作用,从而为胃癌的治疗提供理论依据。方法:用EGCG与培养的MGC803细胞作用相应的时间,孵育结束后,提取细胞DNA,采用甲基化特异性聚合酶链式反应(Methylation-specific PCR,MSP)法检测RECK启动子区域的甲基化及非甲基化情况;同时采用逆转录PCR(RT-PCR)检测MGC803细胞内RECK mRNA水平;提取细胞总蛋白和核蛋白,Western blot检测p65的核转位情况;为进一步探讨NF-κB与RECK基因表达的关系,MGC803细胞与25μM NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)共同孵育,RT-PCR检测其对RECK表达的影响。结果:(1)MSP结果显示,MGC803细胞静息状态下,可检测出RECK基因启动子区域有明显的甲基化条带和非甲基化条带。当MGC803细胞与50μM EGCG孵育96h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多。(2)EGCG能以剂量依赖性与时间依赖性方式促进MGC803细胞RECK基因mRNA的表达。(3)MGC803细胞静息状态下在细胞核内可检测到p65蛋白。当其与50μM EGCG孵育后,p65的核转位水平降低。(4)NF-κB的特异性抑制剂PDTC能抑制MGC803细胞中p65核转位水平,同时能增加RECK基因的表达。结论1. EGCG能降低MGC803细胞RECK基因启动子区域的甲基化水平;2. EGCG能以剂量和时间依赖性方式增高MGC803细胞RECK基因mRNA的表达水平;3. EGCG能抑制MGC803细胞内NF-κB激活,从而可能促进RECK基因的表达。