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树突状细胞(dendritic cells,DCs)是介导交叉提呈的主要抗原提呈细胞,其特殊的胞内微环境使其交叉提呈效率远高于巨噬细胞等其他抗原提呈细胞。DCs对抗原的提呈方式取决于抗原的来源,而对抗原的提呈效率则依赖于抗原物质上所含有的TLRs配体。微生物抗原所携带的病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)可被 DCs 表面的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别而增强DCs的抗原提呈能力。有研究显示,在小鼠巨噬细胞样细胞系(RAW264.7)中,细菌内毒素成分(LPS)通过激活TLR4信号诱导包括NF-κB/Akt等信号在内的多种信号通路活化,从而促进TLR4介导的抗原内吞。但上述通路的激活在微生物抗原诱导交叉提呈中的作用不明。为此,本课题首先用含低剂量内毒素的模式抗原OVA(Ovalbumin)和不含内毒素的模式抗原OVAET(endotoxin-free ovalbumin)分别负载小鼠骨髓来源的DCs,以免疫印迹法检测Akt/NF-κB信号通路活性;接着利用免疫共沉淀分别检测病原微生物抗原负载后Akt、IKKα、IKKβ激酶在早期内体上的转位变化;继而下调相应激酶活性,以免疫荧光、流式细胞术分别检测相应激酶对抗原交叉提呈的影响;最后下调相应激酶活性,利用免疫共沉淀及免疫荧光探究相应激酶对内质网相关蛋白Sec61内体招募的影响。结果显示:OVA负载15-60min,能明显增加Ak、IKKα/β磷酸化水平,且在30 min时磷酸化水平达到最高,同时p100及IκBα的降解也明显增加;OVAET负载15-60 min可引起Akt/IKKα激酶磷酸化水平明显增加,而IKKβ并不被激活,同时p100的降解也明显增加而IκBα并未发生降解,由此提示单纯的抗原负载可引起Akt信号及非经典NF-κB通路活化,而病原微生物抗原负载可引起Akt信号及经典NF-κB通路活化;对Rab5、Akt、IKKα、IKKβ分别进行免疫共沉淀可观察到Akt、IKKα、IKKβ与Rab5均有相互结合,且其活化形式向Rab5+的早期内体转位明显增加;而下调相应激酶活性后,激光共聚焦结果显示,交叉提呈产物SIINFEKL-H2Kb与早期内体标志分子Rab5共定位明显减少,流式细胞术观察也显示交叉提呈产物显著降低;免疫共沉淀及激光共聚焦的进一步观察显示,病原微生物抗原能激活早期内体上的Akt/IKKα/IKKβ信号体活性,由此提示,病原微生物抗原通过诱导早期内体上Akt/IKKα/IKKβ信号体的形成而增强DCs交叉提呈;免疫印迹进一步显示,Akt下调明显抑制IKKα/β的磷酸化水平,提示Akt通过IKKα/β调控NF-κB信号;下调Akt、IKKα/β明显降低Rαb5与Sec61 α和Sec61β的互作,提示,病原微生物抗原通过在早期内体上形成Akt/IKKαα/IKKβ信号体进而激活NF-κB信号而增加Sec61内体招募。综上所述,本课题发现细菌内毒素成分可经经典的NF-κB信号通路影响早期内体上Akt/IKKα/IKKβ信号体活性,从而调控Sec61的内体转位,促进抗原的交叉提呈。