论文部分内容阅读
白内障是全球性的致盲眼病,白内障囊外摘除或超声乳化吸除联合人工晶体植入术是目前首选的治疗方法,然而术后的远期并发症之一——后发性白内障(secondarycataract,posteriorcapsuleopacification,PCO)可使视力再度下降,甚至再次致盲。后发性白内障还影响人工晶体新型材料的研发和可调节式、可注入式人工晶体的临床应用。目前,后发性白内障的治疗主要是Nd:YAG激光或手术后囊膜切开术,这样不仅增加患者心理、经济负担,而且还存在人工晶体损伤、视网膜脱离、黄斑囊样水肿、继发性青光眼、再次混浊等并发症[1],并且残留的混浊囊膜还影响眼后节疾病的诊疗。虽然通过提高手术技巧,改善仪器设备,特别是人工晶体改良等方法,使后发性白内障的发病率有所下降,但是仍有14.1%~18.8%的白内障手术病人需要行囊膜切开术[2-3]。而药物防治后发性白内障如:抗代谢类、细胞毒素、阻止细胞粘附、诱导细胞凋亡等方法均因对晶状体周围组织的毒性作用而限制了他们的临床应用,目前仍局限于实验室研究。因此,选择一种安全、有效的药物防治后发性白内障一直是眼科研究的热点之一。
Thapsigargin(TG)是一种蓓萜内脂化合物,它能特异性地抑制肌浆网/内质网钙泵,破坏Ca2+动态平衡[4-5],有抑制多种细胞增殖的效果,但是TG抑制细胞增殖的机制存在争议。TG也能抑制体外培养的晶状体上皮细胞的增殖,DuncanG[6]等将它应用于体外培养的晶状体囊袋模型,结果表明明显抑制了白内障术后残留的晶体上皮细胞的增殖,由此他们推测TG可能作为预防后发性白内障的药物。
为进一步研究TG抑制晶状体上皮细胞增殖的机制,探讨TG应用于后发性白内障防治的可能性,我们运用不同浓度的TG处理体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04,研究TG增殖抑制发生的分子机制;并将两种不同浓度的TG注入兔眼白内障术后的晶体囊袋内,观察它对兔眼后发性内障形成的影响。本研究工作主要包括以下两部分:
第一部分Thapsigargin对体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04增殖抑制作用及机制探讨目的:研究thapsigargin(TG)对体外培养的晶状体上皮细胞增殖的影响,并探讨细胞增殖抑制的分子机制。
方法:不同浓度的TG处理SRA01/04细胞72小时,噻唑蓝比色法(MTT)分析细胞增殖改变;透射电镜观察细胞超微结构变化;末端脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞核中脱氧核糖核酸(DNA)的断裂情况;流式细胞仪(碘化丙啶,PI法)检测细胞周期中亚G1期含量;并通过激光共焦显微镜和流式细胞仪检测Caspase3活性亚单位(17/19KD)的表达及细胞阳性表达率。
结果:MTT法显示TG为0.325~5μM时,细胞增殖抑制率变化显著,IC50大约为0.8μM。透射电镜下见TG处理SRA01/04细胞膜皱缩,染色体浓缩、边集、核膜裂解、凋亡小体形成。0,0.1,0.5,1,10μMTG处理SRA01/04细胞72小时,流式细胞仪(PI法)及TUNEL法检测细胞凋亡率随着TG浓度的增加而增加,呈浓度依赖性。TG激活Caspase3,细胞阳性表达率也呈浓度依赖性增加;TG为10μM时,几乎每一个细胞浆内Caspase3都被激活。
结论:Thapsigargin激活Caspase3,通过caspase家族级联反应诱导体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞凋亡,且呈浓度依赖性。TG有可能作为预防后发性白内障的药物。
第二部分Thapsigargin防治后兔眼发性白内障的动物实验研究目的:探讨thapsigargin(TG)对兔眼后发性白内障形成的影响。
方法:20只新西兰家兔随机分为两组:A组和B组。右眼为实验组,对侧眼为对照组。所有兔眼均行晶状体囊外摘除术。术毕,实验组(右眼)分别注入0.1mlTG(A组:0.3μM浓度;B组:1μM浓度)于晶状体囊袋内;对侧眼(左眼)注入含相同溶剂的BSS液。术后第1,3,7,10,15,35天运用裂隙灯显微镜观察眼前段的炎症反应及晶状体后囊膜混浊情况。术后第35天,Odrich法评估中央区后囊膜混浊程度。摘除眼球行组织病理学检查。
结果:1μM浓度TG组兔眼后发性白内障的形成明显受到抑制,但存在明显的术后早期的眼前段炎症反应(结膜充血,角膜水肿,前房水混浊等),于术后第15天左右消退。0.3μM浓度TG组眼炎症反应相对较轻,形成后发性白内障的时间较短,与对照组之间无统计学差异(P<0.05)。组织病理切片检查结果显示所有兔眼均未发现明显的炎症细胞浸润,高浓度组兔眼后囊膜区存在增殖的晶状体上皮细胞。
结论:高浓度TG能够延缓兔眼后发性白内障的发展,但是存在早期炎症反应较重,毒性反应明显的并发症。