【摘 要】
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繁殖是养猪生产中的关键环节,繁殖力的高低直接影响养猪的经济效益以及生猪产业的发展。卵泡的发育状态在母猪的繁殖过程中发挥着重要的作用,而颗粒细胞作为卵泡中最大的细胞群体,其雌激素的合成,增殖与凋亡等生理功能会影响卵泡的正常发育与闭锁,因此探究影响颗粒细胞生理功能的因素至关重要。MicroRNA（miRNA）是长度约为22个核苷酸的非编码RNA,主要通过与靶基因mRNA的3’UTR配对使mRNA降解或
【基金项目】
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国家重点研发计划重点专项（2021YFF1000602）； 国家自然科学基金（31802047）；
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繁殖是养猪生产中的关键环节,繁殖力的高低直接影响养猪的经济效益以及生猪产业的发展。卵泡的发育状态在母猪的繁殖过程中发挥着重要的作用,而颗粒细胞作为卵泡中最大的细胞群体,其雌激素的合成,增殖与凋亡等生理功能会影响卵泡的正常发育与闭锁,因此探究影响颗粒细胞生理功能的因素至关重要。MicroRNA（miRNA）是长度约为22个核苷酸的非编码RNA,主要通过与靶基因mRNA的3’UTR配对使mRNA降解或降低其稳定性,并且已有研究表明miRNA参与调控颗粒细胞的生理功能。miR-24-3p已被证明在高产母猪卵巢中高表达,并且在优势卵泡中的表达量显著高于普通卵泡。因此,本实验以猪卵巢颗粒细胞为研究对象,通过miR-24-3p的模拟物（mimics）和拮抗剂（inhibitor）处理,以明确其在颗粒细胞雌二醇合成、增殖和凋亡过程中的作用;通过在线软件预测及双荧光素酶报告实验明确miR-24-3p调控颗粒细胞功能的直接靶基因。本实验的结果如下:1.miR-24-3p促进颗粒细胞的雌二醇合成在猪卵巢颗粒细胞中,过表达miR-24-3p可显著提高雌二醇的浓度,并促进St AR、CYP19A1和CYP11A1的转录和翻译（P＜0.05）;而干扰miR-24-3p则抑制雌二醇的合成,并显著下调CYP11A1、CYP19A1的mRNA水平和CYP11A1和CYP19A1的蛋白水平（P＜0.05）。2.miR-24-3p促进颗粒细胞的增殖过表达miR-24-3p促进颗粒细胞的增殖,显著促进CDK4、Cyclin B、Cyclin D的转录和翻译,并上调Cyclin E的mRNA水平（P＜0.05）;而干扰miR-24-3p抑制颗粒细胞的增殖,显著抑制CDK4、Cyclin B、Cyclin D的表达,并下调Cyclin E的蛋白水平（P＜0.05）。3.miR-24-3p抑制颗粒细胞的凋亡过表达miR-24-3p显著减少早期凋亡和晚期凋亡细胞的比例,显著下调BAX mRNA和蛋白的水平,并上调BCL-2 mRNA的水平,并且在蛋白水平上BCL-2/BAX的比值显著升高（P＜0.05）;而抑制miR-24-3p则显著提高早期凋亡细胞的比例,下调BCL-2的mRNA水平并上调BAX的mRNA和蛋白的水平,同时BCL-2/BAX的比值在蛋白水平上被显著下调（P＜0.05）。4.miR-24-3p靶向P27调控颗粒细胞的增殖与凋亡,并通过靶向TOP1调控颗粒细胞的雌二醇合成通过在线软件分析及双荧光素酶报告实验发现P27和TOP1均是miR-24-3p的直接靶基因。过表达miR-24-3p可抑制P27和TOP1的表达,而干扰miR-24-3p则可促进P27和TOP1的转录和翻译（P＜0.05）。过表达P27可减弱miR-24-3p对颗粒细胞增殖的促进作用和对凋亡的抑制作用,而过表达TOP1则可减弱miR-24-3p对颗粒细胞雌二醇合成的促进作用。综上所述,miR-24-3p通过靶向P27促进颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡,同时miR-24-3p通过靶向TOP1促进颗粒细胞的雌二醇合成。
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