养殖水体中细菌遗传多样性研究

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cracezhangxh
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近年来随着分子生物学技术的迅速发展,从分子水平对微生物的群落结构进行研究己经成为可能。PCR(聚合酶链式反应)、RFLP(限制性片段长度多态性)技术的建立和DNA测序技术的不断完善以及这些技术的融合产生了一种全新、快速、有效的微生物群落结构分析方法,即T-RFLP(末端标记限制性片段长度多态性)。该方法有传统方法无可比拟的优越性,它建立在PCR的基础,不需要分离培养细菌,因而避免了培养方法的弊端。更重要的是该方法可以检测到环境中所有的菌,包括活菌(可培养的和不可培养的)和未降解的死菌。本文利用T-RFLP(末端标记限制性片段长度多态性)技术对虾塘养殖水体中的细菌进行分类,同时检测投加硝化细菌前后水体中细菌的种群变化情况,探索细菌种群变化情况对鱼虾养殖的影响规律。本研究对硝化细菌富集培养系统中微生物多样性进行了研究,结果表明,富集培养的硝化细菌在0-12h为延迟期;12h左右进入对数生长期;60h左右开始稳定期,菌量达到6.03×10~9个;120h以后开始衰亡期。并且在培养到稳定期120h时,硝化细菌的多样性指数相比最高下降了67%,均匀度指数上升了10.3%,硝化细菌丰度比例达到97%。在硝化细菌培养稳定期,数量和其他时期相比较多,并且杂菌最少,因此硝化菌培养稳定期最适合作为投加菌的时期。并对水样进行了为期6个月的跟踪监测,通过比较不同时间水塘水样的T_RFLP图谱结果,找到不同时间均出现的T_RF峰,即虾塘水中稳定存在的细菌,17 bp代表的微生物种类可能性较复杂,不能确定具体的种属,9 bp代表的微生物种类为短芽孢杆菌Brevibacillus shida,23 bp代表微杆菌Microbacteriumorla,18 bp代表的微生物可能是固氮弧菌Azoarcus indigen或者霍氏鲍特菌Bordetellaholmesii。通过比较不同时间水塘水样中细菌的多样性指数和均匀度指数,发现虾塘水中多样性指数逐渐减少,可能和天气逐渐变冷,细菌不能适应水塘环境而死亡造成水塘内多样性降低。同时对10株菌进行基于HaeⅢ和MseⅠ的T_RFLP分析,成功运用T_RFLP技术对10株菌进行区分。
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