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鳞翅目害虫小菜蛾(Plutella xylostella)、玉米螟(Ostrinia furnacalis)是农业上的重要害虫,近年来小菜蛾在田间对化学农药的抗药性上升较快,而玉米螟属钻蛀型害虫,使用传统的方法已难以达到良好的防治效果。crylIel基因是一类新型苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白沉默基因,对小菜蛾、玉米螟显示了较高的杀虫活性。本试验进行了CrylIe蛋白末端缺失的研究,发现其最小活性区,为研究其杀虫作用机理奠定基础,同时为转基因植物和杀虫工程菌的构建提供理论依据。 根据crylIel基因的全长序列,设计了7对引物P001/P656、P001/P659、P001/P648、P001/P634、P045/P656、P105/P656、P045/P648,用于PCR扩增末端缺失的基因片段,以crylIel基因全长基因为模板,分别得到1968bp、1977bp、1944bp、1902bp、1833bp、1653bp、1812bp片段,插入载体pET-21b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达获得7种缺失蛋白:IE656(C末端缺失63个氨基酸)、IE659(C末端缺失60个氨基酸)、IE648(C末端缺失71个氨基酸)、IE634(C末端缺失85个氨基酸)、IE045(N端缺失44个和C端缺失63个氨基酸)、IE105(N端缺失104个和C端缺失63个氨基酸)、IE045-648(N端缺失44个和C端缺失71个氨基酸)。 完成了上述7种蛋白对小菜蛾和亚洲玉米螟生物活性测定,结果表明IE656、IE659对亚洲玉米螟的活性与CrylIel全长蛋白相近。IE648对亚洲玉米螟活性与CrylIel全长蛋白相比提高了60%左右。IE045对亚洲玉米螟的活性与全长CrylIe蛋白相比有所降低,活性是其6.25%。IE105、IE634对玉米螟无活性。可以确定CrylIe蛋白对亚洲玉米螟活性区C末端在第634到648位氨基酸之间,N端的44个氨基酸对玉米螟的活性是必需的。 IE656、IE659对小菜蛾的活性与CrylIel全长蛋白相比稍有降低。IE648对小菜蛾的活性与CrylIel全长蛋白相比提高了30%左右。IE045对小菜蛾的活性与全长CrylIel蛋白相比提高约30%。IE105、IE634对小菜蛾无活性。可以确定CrylIe蛋白对小菜蛾活性区N末端在第45位氨基酸到104位之间,C末端在第634到648位氨基酸之间。两端缺失的IE045-648对小菜蛾的活性是CrylIe全长蛋白的10%。