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目的:利用免疫诱导法建立干燥综合征(Sjogren’s syndrome SS)动物模型,动态观察增液布津汤对SS模型小鼠一般指标及免疫功能的干预调节作用,并从分子细胞生物学角度观察增液布津汤对SS模型小鼠肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白介素-6(IL-6)及颌下腺水通道蛋白-5(AQP5)的影响,为探讨增液布津汤治疗SS的作用机制提供基础依据,明确其治疗靶点,同时为更好地运用于临床提供可靠的实验依据。方法:1.理论研究方法:检索古今中外文献对干燥综合征的中医临床辨证分型、治法方药及实验研究方面的内容进行分析总结。2.实验研究方法:雌性BALB/c小鼠60只,随机分为正常组对照组、模型组、增液布津汤低剂量组、中剂量组、高剂量组和环戊硫酮组。除正常对照组外,其余5组均利用免疫诱导法(注射白百破疫苗+完全弗氏佐剂+SD大鼠颌下腺抗原)建立SS小鼠模型,造模后当天正常对照组及模型组用生理盐水20mL.kg-1ig,中药低、中、高剂量组用增液布津汤(相当于生药6.8、13.6、27.3g.kg-1)ig,阳性对照组用环戊硫酮12.5mg.kg-1ig。首次免疫后第3,7天,用乳化抗原对模型组和用药组加强免疫2次,剂量为0.2mL,多点背部sc。以后每隔14天用乳化抗原加强免疫1次,至实验结束共加强免疫2次,剂量、方法同前两次,正常对照组不作任何处理。在实验过程中,动态观察增液布津汤对SS模型小鼠摄食量、饮水量、体质量及唾液流量的影响。实验结束第50天,摘取各组小鼠颌下腺、胸腺、脾脏,计算颌下腺指数、胸腺指数、脾指数,同时镜下观察颌下腺病理变化,并用ELISA法,测定小鼠血清TNF-α、IL-6含量,用Western印迹法,测定颌下腺细胞AQP5蛋白的表达。结果:1.理论研究结果:在文献资料分析的基础上,我们认为:中医各家虽对该病从不同角度进行了论治,但均是围绕其本虚标实的病理特点进行辨证论治的。本虚即为诸脏腑气血阴阳亏虚,其中主要为阴液亏损,津枯液涸,脏腑不荣,津液输布失常;而标实主要是燥毒、瘀毒互结。故根据气、血、津液理论,拟用养阴益气、宣肺布津、活血通络的增液布津汤治疗本病。2.实验研究结果:2.1一般症状表现:与正常对照组相比,模型组小鼠唾液流量减少、饮水量增加、摄食量减少、体重减轻。此外,正常对照组小鼠精神状态良好,活动自如,皮毛光滑,无脱毛现象;模型鼠精神萎靡、嗜睡、懒动、活动度下降,皮毛光泽度下降,轻度脱毛,皮毛明显疏松,部分小鼠尾部破溃结痛,而增液布津汤能不同程度改善模型小鼠气阴两虚的症状,小鼠轻度脱毛,皮毛疏松不明显。2.2镜下观察颌下腺形态结构变化:模型鼠颌下腺组织出现不同程度的淋巴细胞浸润、腺泡萎缩或消失、导管扩张等病理变化,且颌下腺萎缩,颌下腺指数明显减小,而增液布津汤能明显减轻淋巴细胞浸润并抑制颌下腺萎缩。2.3在免疫功能方面:与正常对照组相比,模型鼠胸腺指数、脾指数均增加(P<O.01,P<0.05),表明机体内发生r较强的免疫反应,而给予药物治疗后,均能显著减小模型鼠的脾指数,胸腺指数,故推测增液布津汤可以抑制机体内增强的免疫反应。2.4对细胞因子TNF-α、IL-6的影响:与正常对照组相比,模型组TNF-α及IL一6含量明显增高(P<O.01);与模型组相比,增液布津汤各剂量组TNF-α及IL一6含量均由不同程度降低(P<0.01)。2.5Western blot测定结果示:与正常对照组相比,模型组AQP5表达水平下降了27.90%(p<0.01);与模型组相比,增液布津汤高、中、低剂量组AQP5表达水平分别升高了32.84%(p<0.01)、12.54%(p<0.05)、4.51%,环戊硫酮组AQP5表达水平升高了20.40%(p<0.01)。结论:增液布津汤可能通过抑制细胞因子TNF-a、IL-6的分泌,间接地抑制了辅助性T细胞(Th)业群增殖和分化,从而减轻免疫炎症反应,缓解SS模型鼠颌下腺淋巴细胞浸润,腺泡、导管结构及免疫器,l==j.的破坏,保护腺体的功能,促进AQP5表达,增加唾液分泌,进一步说明细胞因子及AQP5在SS发病过样中发挥着重要作用,同时,也表明养阴益气、宣肺布津、活血通络法的整体调节作用可有效缓解SS模型鼠气阴两虚的症状。创新点:从气阴两虚的角度,研究养阴益气、宣肺布津、活血通络法对SS小鼠干预作用及其机理,得出该治法通过抑制细胞因子的分泌,减轻免疫炎症反应,保护腺体功能,促进AQP5表达,增加唾液分泌,从而改善干燥症状,进一步说明中医药治疗SS的作用机制是多途径、多环节、多靶点。