抗犊牛腹泻益生菌株的筛选及其产芽孢和产抗菌蛋白条件优化

来源 :四川师范大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:huiyuanai852
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从健康牛的粪便中筛选出对大肠杆菌(Escherichia coli)有较强抑制作用的芽孢杆菌,并对其进行鉴定。以大肠杆菌为指示菌进行初筛和复筛,采用SPSS软件对复筛结果进行显著性分析,以选择抑制大肠杆菌活性较强的菌株,经过形态观察、生理生化试验和16S rDNA全序列分析鉴定其种属;采用稀释活菌计数法测绘这些菌株的生长曲线,利用SPSS软件结合修正的Gompertz方程和Logistic方程对生长曲线进行拟合,以获得这些菌株的生长动力学参数。经过鉴定,筛选得到的对大肠杆菌有较强抑制作用的4株牛源芽孢杆菌均属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);采用SPSS软件拟合得到的生长曲线的相关系数(R)在0.985以上。筛选并鉴定了4株牛源肠道益生菌;采用SPSS软件可以较准确地预测这些菌株的生长动力学参数。研究E.coli拮抗菌株Bacillus amyloliquefaciens BN-10菌株的最佳产芽孢条件,以提高其芽孢生成率。采用单因素试验方法,选择益生菌BN-10菌株的适宜碳源、氮源、无机盐;采用正交试验方法,结合SPSS软件进行极差分析和一般线性模型分析,确定BN.10菌株的最适宜发酵培养基组成和最适宜发酵产芽孢条件。BN.10菌株产芽孢的最适宜培养基组成及发酵条件为:蔗糖1.5%,蛋白胨1.0%,MnSO4 0.05%,CaCl2 0.01%;培养基初始pH 6.0,种龄12 h,接种量10%,装瓶量30mL/250mL,摇床转速200r·min-1,37℃发酵培养72 h。通过研究,获得了BN-10菌株产芽孢的最佳培养基组成和发酵条件,优化后BN-10菌株的芽孢生成率提高到98.70%,细菌数达到2.25×108cfu/mL。对强烈抑制E.coli的牛源肠道益生菌.Bacillus amyloliquefaciens BN-10菌株产抗菌蛋白的发酵条件进行优化。利用单因素分析法,分别考察碳源、氮源和无机盐对BN-10菌株发酵产抗菌蛋白的影响;结合培养基组成正交试验和发酵条件正交试验,利用SPSS软件进行极差分析和一般线性模型分析,考察培养基组成对发酵产抗菌蛋白的影响,确定适宜的发酵产蛋白条件。BN-10菌株产抗菌蛋白的最佳培养基和发酵条件为:培养基组成为蔗糖含量2%,黄豆粕粉5%,ZnSO4含量0.01%,KCl含量0.02%;初始pH 6.0,种子液按2%接种量接种至装瓶量为30mL/250mL的三角瓶中,200 r·min-1,37℃培养24 h。优化后,表征抗菌蛋白产量的抑菌圈面积增大了65.20%。通过发酵条件的优化,获得了BN-10菌株产抗菌蛋白的最佳培养基和发酵条件,抗菌蛋白的产量得到了明显提高。
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