毛花猕猴桃根化学组分提取工艺及抗胃癌活性研究

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毛花猕猴桃,又名毛花杨桃,白藤梨、白毛桃,来源于猕猴桃科植物毛花杨桃Actinidia eriantha Benth.的干燥根,广泛分布于浙江、福建、江西、湖南、广西及广东省区。据《中药大辞典》和《全国中草药汇编》记载具有“清热、利湿、活血消肿、解毒”等功效,传统用于治疗胃癌、乳癌、食管癌和子宫体腺癌等。肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一,目前临床上对于肿瘤的治疗主要手段有手术、化疗、放疗。因这些治疗手段均存在不同程度的毒副作用,会对人体造成损伤,多数患者难以耐受等缺点,所以,寻找有效的肿瘤治疗药物和方法是目前抗肿瘤研究领域的一个重要课题。中医药在治疗肿瘤方面具有很大的优势,配合手术治疗,在减轻放疗、化疗的毒副反应,提高治疗有效率,延长生存时间等方面已显示出广阔的应用前景。本文采用紫外分光光度法对毛花猕猴桃根中总黄酮、总酚和总三萜酸超声提取工艺及含量做了研究。由实验结果得到毛花猕猴桃根总黄酮的最佳提取工艺为超声提取时间30min,提取次数3次,料液比为1:30,乙醇浓度80%;总酚的最佳提取工艺为超声提取时间30min,提取次数2次,料液比为1:30,乙醇浓度60%;总三萜酸的最佳超声提取工艺为超声提取时间30min,提取次数3次,料液比为1:20;生药中总黄酮、总酚、总三萜酸含量分别为1.092%,0.991%,1.19%。以SGC-7901、 MGC-803、RKO以及HepG2四种人肿瘤细胞为模型,采用MTT法对毛花猕猴桃根的乙醇总提物和四个极性提取部位进行细胞毒性筛选。结果显示,100μg/mL的乙酸乙酯部位对SGC-7901细胞的抑制作用最为显著,抑制率达92%(P<0.01);以SGC-7901细胞为模型,对乙酸乙酯部位抗胃癌活性进行研究,发现乙酸乙酯部位对SGC-7901细胞抑制具有浓度和时间依赖性,其24,48,72h的半数抑制浓度分别为57μg/mL、41μg/mL及35μg/mL(P<0.01);100μg/mL的乙酸乙酯部位作用12h后,发现其能诱导SGC-7901细胞凋亡,通过琼脂糖凝胶电泳观察到明显的DNA ladder;流式细胞术检测结果发现不同浓度(40、60、80μg/mL)乙酸乙酯部位均可诱导SGC-7901细胞凋亡,其作用随着给药浓度的增加而增强;RT-PCR和Western Blot检测,不同浓度(40、60、80μg/mL)的乙酸乙酯部位干预SGC-7901细胞后,细胞内促凋亡基因Bax和凋亡的执行蛋白Casepase-3的表达随着给药浓度的加大而增多(P<0.01),抑制凋亡基因Bcl-2的表达随着给药浓度的加大而减少(P<0.01)。综上我们的初步实验结果,毛花猕猴桃具有良好的抗胃癌活性,其抗肿瘤的物质基础及作用机制有待进一步研究,以为其在抗肿瘤领域的开发利用提供有力的科学依据。
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