【摘 要】
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本研究采用5-溴脱氧尿苷三磷酸(5-BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP),对野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因进行了体外诱变.本试验采用基因体外定向进化策略中PCR基因诱变技术
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本研究采用5-溴脱氧尿苷三磷酸(5-BrdUTP)部分取代脱氧胸苷三磷酸(dTTP),对野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶基因进行了体外诱变.本试验采用基因体外定向进化策略中PCR基因诱变技术,使用碱基类似物5-溴脱氧尿苷三磷酸为诱变剂,利用热稳定性的Taq聚合酶不具备校对功能的特点而引入突变,突变库的筛选用锥虫蓝淀粉(LBSP)鉴别培养基.经过多轮诱变,得到五个具有高酶活的诱变基因,并在Genebank上注册,序列号为AY645667,AY645668,AY645669,AY645670,AY645671.利用生物学软件DNAman和出发基因序列进行比较,分析了突变位点和酶功能变化的相应关系.本试验的工作进一步验证了这一方法的可行性,并为研究α-淀粉酶基因突变位点和酶功能的关系提供了材料,从而为进一步研究α-淀粉酶基因进化过程打下了基础.
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