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本文利用脐带血分离出造血干/祖细胞,研究其在体外定向诱导分化为T淋巴细胞,从而证明造血干/祖细胞具有向T淋巴细胞分化的能力。并为研究T细胞生物学特性及细胞免疫提供技术平台。应用MACS方法分离人脐带血CD34~+细胞接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上,IMDM液体培养基含20%人AB血清并加入FL、IL~12、IL-7和IL-2细胞因子组合,于培养7、14、21、28、35、42天取非贴壁细胞用PBS洗两遍,利用流式细胞仪对细胞免疫表型进行检测。培养4周后的T淋巴细胞进行PHA、IL-2非特异性抗原刺激,瑞士染色观察细胞形态。培养5周后的T淋巴细胞进行肿瘤细胞杀伤实验。结果:2周后,CD4~+CD8~+非成熟T淋巴细胞占细胞总数的0.3%~13.3%,4~5周CD4~+CD8~+T淋巴细胞达到高峰占16.6%~26.5%,且CD3~+CD4~+CD8~-和CD3~+CD4~-CD8~+T淋巴细胞逐渐增多,6周后达26.5%~64.9%和11.6%~38.9%。培养成熟的T淋巴细胞经PHA+IL-2刺激后细胞数量增多至3~5倍,瑞氏染色鉴定可见大原始淋巴细胞存在,T细胞转化为淋巴母细胞,细胞内可见核仁,部分细胞出现有丝分裂现象。培养成熟的T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞K562杀伤率570nm和490nm的光密度(OD)分别为19.44%和10%。因此,利用人脐血CD34~+细胞体外接种到人胎儿胸腺基质单层细胞上加FL、IL-12、IL-7和IL-2细胞因子组合条件下,可诱导分化出T淋巴细胞,并且培养的T细胞对有丝分裂素刺激有增殖反应以及具有杀伤肿瘤细胞的效应。从而为T细胞的基础免疫学研究及临床治疗需要提供了研究及应用素材。这项研究也证明了脐带血可以作为多潜能造血干/祖细胞的替代源,具有向T淋巴细胞分化的能力,对扩大基因治疗和移植研究范围具有深远意义。