心死亡与脑死亡供体胰岛移植的比较研究

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目的:在移植技术已经相对成熟的今天,供体资源紧缺已成为制约器官移植发展的主要原因。欧美国家,每天约有18个人因等不到供体器官而死亡,其器官供需比例约为1:3;在中国,这一比例高达1:30。为达到完全脱离胰岛素,胰岛移植常需将来源于多个供体的胰岛移植给一名受体,这在一定程度上加大了胰腺器官供求之间的距离。目前虽然已有活体胰岛移植成功的个案报道,但供、受体可能因此承受严重的生理和心理负担,不被广泛接受。心死亡供体胰腺因热缺血损伤不适合胰腺移植,可成为胰岛移植的宝贵资源,这在国外已有报道。本研究以脑死亡供体胰腺为参照,探索心死亡供体胰腺是否适用于临床胰岛移植。方法:UW液器官灌注后,标准多器官采集技术获取9名心死亡供体及5名脑死亡供体肝脏、胰腺等器官,UW液静置保存送入手术室。在无菌条件下去除脾脏、十二指肠,将胰腺送入GMP实验室;经胰腺修剪去除多余的脂肪组织及筋膜、Liberase MTF C/T注射器灌注胰腺,灌注满意后切成体积约3×3×1cm3的组织块放入消化罐中开始消化过程,温度控制在36-38℃之间;每2分钟复取样一次,DTZ染色,倒置相差显微镜下观察。当游离胰岛细胞百分比(游离胰岛细胞比胰岛细胞总数)大于50%时,用含10%人血白蛋白的终止液终止消化。反复离心、去上清液以洗掉残余的消化酶;COBE2991细胞收集器、Biocoll连续密度梯度离心纯化胰岛。比较不同供体胰岛纯化前后胰岛当量、每克胰腺组织胰岛当量及胰岛纯度;FDA/PI染色倒置相差显微镜下观察并计算胰岛存活率;葡萄糖刺激实验评价胰岛体外功能。比较不同批次Liberase MTF C/T消化时间、胰岛产量,以了解不同批次的酶是否影响实验结果,Liberase MTF C/T消化结果是否具有可重复性。结果:两组胰腺供体年龄、体重、胰腺重量、冷缺血时间无差异(P>0.05)。心死亡供体胰腺纯化前后胰岛当量、每克胰腺组织胰岛当量分别为814964.89±34949.52、448144.22±63230.98、10928.80±1021.73/g和6047.3707±1128.35/g;脑死亡供体胰腺分别为817326.80±21791.49、498056.00±27319.09、11278.69±880.78/g、6866.9481±542.07/g,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。心、脑死亡供体胰腺纯化前后胰岛纯度分别为5.0±0.7%vs.5.2±0.8%, P>0.05;64.4±5.9%vs.66.4±4.7%, P>0.05,差异无统计学意义。两组纯化后胰岛存活率分别为91±2%、92±3%,P>0.05。脑死亡组只有5个胰腺,不能满足不同批次Liberase至少包含2个胰腺,故未做统计分析。心死亡组,N(批次1)=4、N(批次2)=2N(批次3)=3;三组间胰岛产量无差别。结论:供体器官短缺是全世界面临的难题;本研究发现心死亡供体在热缺血时间小于19.1±1.8min情况下,分离胰岛产量、纯度、存活率同脑死亡组相当,可用于临床胰岛移植。不同批次LiberaseMTF C/T间变异度小,消化时间及纯化前后胰岛产量等无统计学差异。
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