维药鹰嘴豆化学成分及降糖活性研究

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本论文对鹰嘴豆种子的化学成分、紫外分光光度法校正测定鹰嘴豆总异黄酮含量、不同提取部位的降糖活性筛选及其作用机制、以及染料木素的结构修饰与其乙氧基化产物细胞降糖活性对比等方面进行了相关研究。化学成分方面,通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱(Sephadex LH-20)、高速逆流色谱(High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC)、高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)等色谱手段从鹰嘴豆种子的乙酸乙酯部位分离得到5个化合物,并利用1H-NMR、13C-NMR、DEPT和ESI等仪器分析手段对化合物的结构进行了鉴定。5个化合物分别为β-谷甾醇、阿魏酸、鹰嘴豆芽素A、染料木素和邻苯二甲酸二异丁酯。阿魏酸为首次从鹰嘴豆中分离得到。利用高速逆流色谱分离乙酸乙酯部位和95%乙醇部位的基本参数设置为固定相流速:2ml/min;流动相流速0.5ml/min;主机转速:1800r/min,正转;温度25℃。摸索到分离乙酸乙酯部位的最佳溶剂系统为正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水=6:4:4.2:1(v/v/v/v),波长254nm,固定相保留率为65%。95%乙醇部位的最佳溶剂系统为氯仿:甲醇:水=4:2.5:2(v/v/v/v),波长254nm,固定相保留率为65%。传统的紫外分光光度法测定异黄酮总含量,方法简单、快捷,但当使用一种标准品测定含有多种异黄酮成分的混合液时测定结果往往误差较大。本研究通过校正提高了该方法的精确度,校正前平均回收率为93.74%,校正后平均回收率为97.95%,校正后比校正前平均回收率增加了4.25个百分点。随着混合标准液加入量的增加,回收率的增加幅度整体呈增加趋势,即测定精确度提高更加明显。采用不同极性的溶剂溶剂对鹰嘴豆种子进行渗漉提取,分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、95%乙醇部位、70%乙醇部位、30%乙醇部位五个不同提取部位。利用自发性糖尿病KKAy小鼠进行降糖活性部位筛选。测定五个不同部位对小鼠体重、进食量、饮水量、空腹血糖以及胰岛素耐量试验(Insulin Tolerance Test,ITT)以及对血脂四项甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)和内脏指数肾体比、肝体比的不同影响结果,从而筛选出治疗效果最为明显的活性部位,即乙酸乙酯部位。通过试验研究乙酸乙酯提取部位对KKAy小鼠肌肉组织PPARα(过氧化物酶体增殖物激活受体-α)和PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体-γ)2种基因表达量的影响。结果表明乙酸乙酯提取部位对各项指标的综合影响最大,是改善胰岛素抵抗,治疗2型糖尿病的相对较好活性部位。推测通过改变PPAR相关基因的表达量来直接或间接的改善胰岛素抵抗,从而起到降低血糖,治疗糖尿病的作用。染料木素为异黄酮类成分,具有雌性激素作用、抗氧化作用、降血脂作用、增加骨密度等作用。但是染料木素的脂溶性和水溶性都较差。通过对染料木素的乙氧基化结构修饰合成5,7,4’-三乙氧基染料木素和7,4’-二乙氧基染料木素两个化合物,增加了染料木素的脂溶性。并将染料木素和两个化合物分别做了细胞增殖实验。结果表明在92.5μmol/L条件下,5,7,4’-三乙氧基染料木素的降糖活性最优,且与染料木素相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。277.5μmol/L条件下,7,4’-二乙氧基染料木素的降糖活性最优,且与染料木素相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。
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