猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是冠状病毒家庭成员。猪流行性腹泻病毒感染猪的肠道上皮细胞而引起严重腹泻,尤其对于仔猪,感染后死亡率几乎为100%。该病是以发病猪呕吐、腹泻、严重脱水为临床特征的高度接触性肠道传染病。在世界范围内分布,呈地方流行性,尤其在东亚各国流行更为广泛,是各养猪国家导致仔猪早期死亡的重要疫病之一。针对猪流行性腹泻病毒经黏膜感染的特点,研制能有效的刺激黏膜免疫系统产生局部免疫应答,进一步引起全身性系统免疫反应的疫苗,对该病的防治具有重要意义。本研究以乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000作为递呈抗原的活菌载体,以猪流行性腹泻病毒免疫保护性抗原S蛋白部分基因片段ps420(499-638aa)为靶基因,构建了表达猪流行性腹泻病毒ps420基因的重组乳酸乳球菌表达系统。以含有猪流行性腹泻病毒ps420基因的质粒pPG612.1-ps420为模板,PCR扩增出约420bp的目的基因ps420,并克隆到pMD18-T simple载体,进行酶切、PCR鉴定,重组质粒命名为pMD18-TS-ps420。重组质粒与表达载体均经限制性内切酶双酶切,回收目的基因片段ps420与表达载体pNZ8112连接,电转化感受态NZ9000,筛选阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定,重组质粒命名pNZ8112-ps420,重组乳酸乳球菌pNZ8112-ps420/NZ9000。重组菌pNZ8112-ps420在GM17(含氯霉素)培养液中培养,经Nisin诱导目的蛋白的表达。重组菌中蛋白的表达及表达蛋白的定位通过SDS-PAGE、Western blotting和间接免疫荧光进行鉴定。考马斯亮蓝染色结果显示:pNZ8112-ps420的菌体裂解物表达了15KD的融合蛋白,诱导后表达的ps420蛋白经Western-blot分析,可检测到特异性反应条带。将重组菌免疫接种家兔,每只家兔经口灌服1010CFU重组菌,每次连续灌服3d,每次间隔14d,定期采集血清样本进行PEDV细胞中和试验,结果表明,重组菌可有效诱发血清中IgG产生。血清中和抗体效价可达1:90。从而初步证明ps420蛋白具有中和活性,同时也证明了乳酸乳球菌可以作为口服免疫传递抗原的载体。