牙龈卟啉单胞菌脂多糖对食管上皮细胞增殖和迁移的影响

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背景:食管癌(esophageal carcinoma,EC)主要包括食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EAC),西方国家以EAC为主,而东方国家则以ESCC居多。EC位居全球肿瘤发病率的第八位,死亡率位居第六位。大部分患者诊断时已处于中晚期,即使采用手术、化疗、放疗或放化疗联合等方法,患者预后仍很差,5年生存率仅为15%~25%。因此,有必要进一步阐释EC发病机制并探索新的诊疗方案。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)是慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)重要致病因素之一,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是其主要毒力因子。P.gingivalis与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)及头颈部鳞状细胞癌发生、发展的关系密切,但其与ESCC关系的研究尚少。细菌感染是癌症的主要危险因素之一,但P.gingivalis与EC的关系及其具体机制尚未明确,值得探索。目的:明确Pg-LPS对永生化食管上皮细胞Het-1A和食管鳞癌细胞EC109增殖、迁移能力的影响,探索其可能的作用机制,为合并P.gingivalis感染的EC患者的早期口腔干预及EC高危人群的筛查提供理论基础。方法:1.培养永生化食管上皮细胞Het-1A和食管鳞癌细胞EC109,实验组为Pg-LPS作用的Het-1A和EC109细胞,对照组为无Pg-LPS作用的Het-1A和EC109细胞。2.采用CCK8技术检测对照组和Pg-LPS作用后的永生化食管上皮细胞Het-1A和食管鳞癌细胞EC109的增殖情况变化。3.采用Transwell迁移实验或细胞划痕实验检测对照组和Pg-LPS作用后的永生化食管上皮细胞Het-1A和食管鳞癌细胞EC109迁移能力变化。4.采用聚合酶链式反应(polmerase chaill reaction,PCR)技术,检测对照组和Pg-LPS作用后的永生化食管上皮细胞Het-1A或食管鳞癌细胞EC109的增殖和迁移相关基因KI-67、AKT1、EGFR、P53、CCND1、PDNFRb、ARTN、RAC1、Rho A、CXCR4-1、CXCR4-2、MTA1 m RNA表达情况变化。5.进一步采用Western blot技术检测Pg-LPS对永生化食管上皮细胞Het-1A和食管鳞癌细胞EC109 ARTN蛋白表达水平的影响。结果:1.CCK-8测定结果显示,Het-1A细胞在各实验浓度的Pg-LPS作用后的24 h、48 h与对照组相比吸光度显著上升(P<0.05)。EC109细胞在5 ug/ml及10 ug/ml的Pg-LPS作用后24 h、48 h与对照组相比吸光度显著上升(P<0.05);1 ug/ml的Pg-LPS在作用24 h后实验组和对照组无明显差异(P>0.05),而作用48 h后吸光度较对照组显著上升(P<0.05)。2.Transwell结果表明,Pg-LPS作用后,Het-1A细胞穿膜数量明显多于对照组(P<0.05);细胞划痕愈合实验结果表明,Pg-LPS作用24 h及48 h后,EC109细胞相对覆盖面积明显高于对照组(P<0.05)。3.PCR检测结果显示,Pg-LPS作用后的Het-1A细胞ARTN、KI67、AKT1、EGFR、P53、PDNFRb、RAC1、Rho A、CXCR4-1、CXCR4-2、MTA1 m RNA的表达较对照组明显增高,差异具有统计学意义;Pg-LPS作用后EC109细胞ARTN、KI67、AKT1、EGFR、P53、CCND1、RAC1、Rho A、CXCR4-2、MTA1 m RNA的表达较对照组明显增高,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。4.Western blot结果显示,Pg-LPS作用后的Het-1A和EC109细胞ARTN蛋白表达量较对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Pg-LPS可以增强Het-1A和EC109细胞的增殖、迁移能力。Pg-LPS作用于细胞后ARTN的表达量增加,进一步促进AKT1、CCND1、MTA1、CXCR4的表达,可能是Pg-LPS影响食管上皮细胞生物学行为的机制,但其具体机制及信号转导途径有待进一步探索。
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