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根据已发表的流产型布鲁氏菌(B.abortus)HtrA(High temperature requirment A)基因和GroEL(热休克蛋白)基因分别设计特异性引物,提取新疆绵羊种布鲁氏菌(B.ovis)菌株80/019的总DNA,以其为模板通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到HtrA和GroEL基因,回收纯化后将HtrA和GroEL基因用T4DNA连接酶连于克隆载体pBS-T上,热击法转化受体菌大肠杆菌DHIOB,蓝白斑筛选阳性克隆,酶切鉴定、测序,证明其中含有HtrA和GroEL基因片段,分别命名为pBS-T-HtrA和pBS-T-GroEL,用Sac I/EcoR I双酶切重组质粒pBS-T-HtrA和原核表达载体质粒pET-28a,同时用xho I/BamHI双酶切重组质粒pBS-T-GroEL及原核表达载体质粒pET-28a,通过T4DNA连接酶将目的基因片段插入线性化表达载体pET-28a中,转化受体菌BL21,经菌落PCR、质粒PCR扩增及质粒酶切鉴定,证实HtrA和GroEL基因已克隆到表达载体中,表明正确构建了HtrA和GroEL基因的原核表达载体pET-28a-HtrA和pET-28a-GroEL。经过IPTG诱导蛋白表达,SDS—PAGE、western-blot检测所表达的蛋白。结果:扩增出B.ovis菌株80/019HtrA基因的片段的开放阅读框大小为154bp,与B.abortus、B.suis、B.melitensis HtrA基因的核苷酸同源性分别为99.68%、99.55%、99.81%。推导其氨基酸序列有513个编码氨基酸,分别与B.suis、B.abortus、B.melitensis的HtrA基因氨基酸的同源性为98.25%、98.25%和98.44%。在布鲁氏菌各个种之间,HtrA基因的核苷酸和氨基酸同源性都达到了90%以上。GroEL基因的片段与B.abortus、B.suis、B.melitensis GroEL基因片段大小一致,均为1641bp,与B.aborts、B.suis、B.melitensis GroEL基因的核苷酸同源性分别为99.88%、99.82%、99.88%,推导其氨基酸序列编码546个氨基酸,与B.suis、B.abortus、B.melitensis GroEL基因氨基酸的同源性都大于99%。由此表明布鲁氏菌HtrA、GroEL基因有很高的保守性,在B.ovis中只有个别的核苷酸发生了改变。经SDS-PAGE、westem-blot检测表明,成功构建了pET-28a-HtrA和pET-28a-GroEL表达载体,并在大肠杆菌中实现了表达。结果表明:HtrA、GroEL基因保守性高,表达产物丰富,能和布鲁氏菌免疫的兔血清发生特异性结合,和国外研究的结果一致,可能成为新疆绵羊种布鲁氏菌基因工程苗的候选基因。