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本研究以28种观赏葫芦种质为材料,运用形态学标记和RAPD分子标记,对其进行了遗传亲缘关系鉴定。同时研究了‘新疆大葫芦’的组培快繁技术,为资源保存、新种质培育、转基因技术打下基础。研究结果如下:1.形态学分析(1)根据观赏葫芦形态学性状观察标准,对形态学性状的遗传多样性参数统计结果显示,25个形态学性状的平均变异系数为47.01%,每个性状的变异系数均大于21%,表现了丰富的多样性。其中突出的是果实重量、节间长度、果形、果实长度、单株果实数、果实宽度、叶形、百粒重等性状(54.72%~106.63%)。变异最大的是果实重量的性状(106.63%)。(2)运用SPSS22.0软件对25项形态指标进行聚类中,28份材料在标尺16处可分为三类,‘飞碟’和‘疙瘩’为一类,‘新疆大葫芦’和‘巨型筒子’为一类,其余种质为一类;在标尺12处时可分为七个类群,其中第Ⅳ类又可分为五个亚类。(3)从形态学性状的主成分的分析结果表明,前九个主成分的总方差贡献率为83.14%。第一主成分方差贡献率为23.73%,其中,花序梗长、花直径、果实宽度、藤长、果实长度、花期、植物生长习惯和果实重量的权重系数均较大,表明第一主成分主要反映了花和果实的定量性状特征,并表现出了丰富的形态学多样性。(4)花粉形态多样性分析表明:根据花粉粒大小和花粉形状可将‘飞碟’和‘疙瘩’分为一类;根据P/E值,可将28份观赏葫芦种质分为三类。观赏葫芦花粉,在形状、萌发沟的数量和P/E(极轴/赤道轴)值上表现出一定的相似性,也对种质分类和亲缘关系鉴定有一定的参考价值。2.随机扩增多态性分子标记(RAPD)分析(1)构建了观赏葫芦RAPD反应体系:30 ng/μl模板DNA 2μl,2.2 UTaq DNA聚合酶0.44μl,0.5μmol/L引物1.25μl,1×PCR Buffer 2.5μl,100μmol/L d NTPs 1.0μl;总体积25μl,退火温度为37℃。(2)在62条10 bp的随机引物中筛选出18条多态性好、稳定性高的随机引物,对28个观赏葫芦种质DNA进行PCR扩增,总扩增谱带为111条,其中102条为多态性谱带,多态性比例为91.89%。每个引物扩增的谱带数目为4~10条,平均每条引物扩增出32条谱带。(3)28份材料的RAPD标记的数据统计分析结果表明:所有材料的遗传相似系数(GS)跨度在0.32到0.89之间。采用UPGMA法进行聚类分析得到28份材料的亲缘关系聚类树状图。在L1(GS=0.45)处,供试的28个观赏葫芦种质可分为三大类,一类是1号种质‘飞碟’,另一类是21号‘中号白皮’和23号‘宝葫芦’,其余的为一类。在L2(GS=0.72)处,供试的28个观赏葫芦种质可分为11类。3.确定适合‘新疆大葫芦’组织培养的条件(1)‘新疆大葫芦’组织培养灭菌实验表明,Hg Cl2,NaClO和H2O2三种不同灭菌材料及浓度的接种污染和萌发影响不同。灭菌最好的材料是Hg Cl2,最佳的灭菌条件为:0.3%浓度的Hg Cl2灭菌10 min,在此条件下,污染率为22%,发芽率为75%。(2)不同外植体材料诱导的丛生芽数量不同,茎尖,茎段和子叶3个不同外植体及不同激素配比对丛生芽的诱导具有不同的影响。茎尖的最高增殖系数是6,茎段最高的增殖系数为5.47,子叶的最高增殖系数为5.04;诱导丛生芽增殖的最佳培养基是:MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.15 mg/L。(3)诱导‘新疆大葫芦’丛生芽生根最佳培养条件是:1/2 MS+NAA 0.2 mg/L此时的诱导生根率为95.33%。