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目的:采用二甲亚砜(DM SO)诱导人HL-60细胞分化建立中性粒细胞模型,探讨胃癌细胞对中性粒细胞表型及功能影响,以及在胃癌发生发展中的作用及机制,并采用小鼠骨髓来源的原代中性粒细胞进行体外实验验证,为证实肿瘤相关中性粒细胞促进胃癌恶性进展提供理论基础和实验依据,同时也为靶向肿瘤相关中性粒细胞治疗胃癌提供新的策略和靶点。方法:(1)采用1.25%DM SO诱导HL-60细胞分化为中性粒细胞样细胞(HL-60N)。将胃癌细胞与HL-60N共培养,探究胃癌细胞生物学功能变化。Transwell迁移和基质胶侵袭实验检测胃癌细胞迁移、侵袭功能变化情况;MTT实验检测胃癌细胞存活情况;细胞克隆形成实验检测胃癌细胞增殖情况。(2)收集胃癌细胞条件培养基处理HL-60N,收集活化后HL-60 N上清,作用于胃癌细胞,探究胃癌细胞生物学功能变化。Transwell迁移和基质胶侵袭实验检测胃癌细胞迁移、侵袭功能变化情况;MTT实验检测胃癌细胞存活情况;平板克隆实验检测胃癌细胞增殖情况。(3)采用实时荧光定量R T-PCR检测胃癌细胞共培养组和胃癌细胞条件培养基活化组HL-60N中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α等基因表达情况;实时荧光定量R T-PC R检测HL-60N共培养和活化HL-60N培养上清处理胃癌细胞EMT相关指标E-cadheri n、Vimentin、ZEB-1、S lug与干性相关指标Sox2、Oct 4和Nanog的基因表达情况;Western blot检测胃癌细胞ERK信号通路活化情况;采用ERK信号通路抑制剂预处理胃癌细胞后,再用活化HL-60N培养上清处理,Transwell实验检测胃癌细胞迁移、侵袭功能变化情况,实时荧光定量RT-PC R检测胃癌细胞EMT相关指标基因表达情况。(4)流式分选小鼠骨髓中性粒细胞,并用小鼠来源胃癌细胞MFC条件培养基处理,实时荧光定量R T-PCR检测中性粒细胞IL-1β、IL-6和TNF-α基因表达情况;ERK信号通路抑制剂预处理小鼠胃癌细胞后,再用活化小鼠骨髓中性粒细胞培养上清处理,Transwell迁移实验和基质胶侵袭实验检测小鼠胃癌细胞迁移、侵袭功能变化情况。结果:(1)与HL-60N细胞共培养后,胃癌细胞迁移、侵袭能力增强,而增殖能力无明显变化。(2)胃癌细胞条件培养基活化的HL-60N培养上清促进胃癌细胞迁移和侵袭,而对胃癌细胞增殖无显著影响。(3)HL-60N与胃癌细胞共培养或经胃癌细胞条件培养基处理后,炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α基因表达上调。与HL-60N共培养或活化HL-60N培养上清处理的胃癌细胞EMT指标E-cadhe rin表达下调,Vimentin、ZEB-1和Slug表达上调,干性相关指标Sox2、Oct4和Nanog表达也上调。活化HL-60N培养上清可激活胃癌细胞ERK信号通路,阻断ERK信号通路显著抑制活化HL-60N培养上清促进胃癌细胞迁移和侵袭作用。(4)经小鼠胃癌细胞条件培养基活化的小鼠骨髓中性粒细胞IL-1β、IL-6和TNF-α基因表达上调,其培养上清促进胃癌细胞迁移和侵袭,而阻断ER K信号通路显著抑制其作用。结论:中性粒细胞与胃癌细胞共培养或经胃癌细胞条件培养基活化后,高表达炎症因子,并通过活化ERK信号通路,诱导胃癌细胞发生EMT,进而促进其迁移和侵袭。中性粒细胞与胃癌细胞的相互作用可能是其促进胃癌发生发展的重要机制,可能成为胃癌治疗的新靶点。