前言 哮喘是以气道阻塞和气道高反应为主要特征的慢性气道炎症性疾病，其发病机制还不完全清楚。今年来，免疫性炎症学说和神经源性炎症学说越来越受到关注。 随着有关哮喘的研究日益增加，哮喘豚鼠模型被广泛应用，但我们在工作中发现许多问题，诸如豚鼠对卵蛋白反应的个体差异性以及观察气道炎症和气道重塑的最佳时间等。本实验拟通过探讨哮喘豚鼠模型制备中的问题，为使用动物模型研究哮喘的研究者提供更为理想的实验模型。 降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）是含有37个氨基酸的多肽，广泛分布于中枢和周围神经系统。有研究表明，CGRP具有强烈的收缩呼吸道平滑肌、促进血浆渗出和粘液分泌的作用，这提示CGRP可能参与哮喘发病的病理生理机制。下呼吸道感觉神经纤维的胞体位于结状神经节和C₇～T₅段脊神经节，中枢突进入脊髓背角和孤束核。哮喘时，这些部位的CGRP是否有变化是值得探讨的问题。 神经生长因子（nerve growth factor，NGF）属于神经营养因子基因家族，是一种影响神经细胞生长、发育、存活的多功能神经营养因子。新近的研究表明，NGF具有更广泛的生物学活性，特别是它在调节免疫及炎症网络方面的作用正引起人们的普遍关注，被认为是连接神经系统和免疫系统的纽带。哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统神经生长因子是否参与哮喘的发病过程是值得探讨的问题。 实验方法 观察哮喘豚鼠反复吸入卵蛋白时间、对卵蛋白的敏感程度、哮喘严重程度及咳嗽程度与气道炎症和气道重塑的关系；采用免疫组织化学方法结合显微图像分析，观察哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统CGRP表达的变化；采用免疫组织化学方法结合显微图像分析，观察哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中NGF表达的变化以及甲泼尼龙琥珀酸钠对NGF表达的影响；采用免疫组织化学方法和原位杂交结合显微图像分析，观察哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传人系统NGF表达的变化。 实验结果 1．与对照组相比哮喘各组支气管肺泡灌洗液中均有明显的嗜酸细胞浸润，并随吸人卵蛋白时间的延长，嗜酸细胞数量明显增加河＜队05八2周和4周组气道重塑不明显，而8周和12周组有明显的气道重塑。对卵蛋白不同敏感程度豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸细胞数量无明显差异(P＞0．05人哮喘豚鼠随着哮喘严重程度的增加，支气管肺泡灌洗液中嗜酸细胞数量也明显增加什＜O．05人与不咳嗽和轻度咳嗽豚鼠相比，重度咳嗽豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸细胞数量明显增加河＜0＊门。 2．CGRP在对照组豚鼠嗜酸细胞、淋巴细胞和肺泡巨噬细胞中少量表达；下呼吸道CGRP免疫反应纤维呈棕色点状或串珠状，弯曲走行于气道上皮和支气管平滑肌；结状神经节和 C，－Ts段脊神经节内存在 CGgy免疫反应阳性细胞，阳性反应位于胞浆，其内充满棕色颗粒；CGRP免疫反应见于脊髓背角的各个板层，其中以板层＊的密度最大，呈点状分布；CGRP免疫反应呈点状分布于孤束核。 哮喘豚鼠肺泡巨噬细胞中C＊RP含量较对照组明显增加(P＜0．01八下呼吸道C＊RP免疫反应纤维明显多于对照组门＜O，05入呈线状或树枝状分布；结状神经节和C，－Ts段脊神经节内CGny免疫反应阳性细胞较对照组明显增多，反应也明显增强(P＜O．05X脊髓背角和孤束核内C＊RP免疫反应也较对照组明显增强k＜0．05人 3．对照组豚鼠支气管肺泡灌洗液中主要为肺泡巨噬细胞(约占 80％以上人还含有少量的嗜酸细胞和淋巴细胞。 与对照组相比，哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸细胞和淋巴细胞数量明显增加(P＜O．01，P＜0．05入虽然肺泡巨噬细胞百分率相对下降，但肺泡巨噬细胞绝对数量却增加河＜0．01人与哮喘组相比，甲泼尼龙组支气管肺泡灌洗液中嗜酸细胞、淋巴细胞数量明显减少汗＜O．01，P＜O．05X肺泡巨噬细胞绝对数量未见明显改变冲＞O．05人 4．对照组豚鼠嗜酸细胞、淋巴细胞和肺泡巨噬细胞中，可见NGF少量 ·二· 表达。 与对照组相比，哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中NGF阳性嗜酸细胞和淋 巴细胞明显增多(P＜o．01，P＜O．05人肺泡巨噬细胞中＊＊F过表达（P＜ 0．of人且呈 NGF阳性反应的小型肺泡巨噬细胞数量大大多于大型肺泡巨 噬细胞。与哮喘组相比，甲泼尼龙组NGF阳性嗜酸细胞、淋巴细胞数量明 显减少汗＜o．01，P＜o．05人肺泡巨噬细胞中＊辞表达也明显减少u＜0． of）。 5．对照组豚鼠气道上皮内可见到含有NGF免疫反应阳性颗粒的上皮 细胞，阳性反应物位于胞浆，呈棕褐色。C，－Ts段脊神经节内，NGF免疫反 应阳性细胞遍布整个神经节，多呈大圆形或多角形。脊髓背角的NGF免疫 反应阳性细胞多呈小圆形，遍布整个背角。原位杂交显示，对照组豚鼠气道 上皮细胞人，－T。段脊神经节及脊髓背角内有NGF mRNA表达。 哮喘豚鼠气?