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斑马鱼作为一种模式生物一直受到大家的青睐,然而,其性别决定机制却仍不清楚。大多数的细胞遗传学研究并未发现斑马鱼具有二态性的性别决定染色体,随着基因组测序的基本完成,高分辨率的基因图谱分析也并未发现存在主要的性别决定开关。最近有研究表明环境因素在自然环境范围内的变化对斑马鱼的性别比例也具有微弱的影响。因此,斑马鱼的性别由多基因决定并受环境影响。 Wnt信号通路参与哺乳动物的性别分化早已确定,最近的基因表达研究指出Wnt信号通路在硬骨鱼的生殖方面也具有潜在的功能。关于参与性腺发育的Wnt配体已有不少报道,尤其是Wnt4。而参与信号传递的Frizzleds受体却知之甚少。本文通过精卵巢RT-PCR分析,鉴定出8个具有性别差异表达的frizzleds,即fz1,fz2,fz3a,fz4,fz7a,fz9a,fz9b,fz10。进而通过Talens基因敲除技术构建frizzleds斑马鱼突变体,对可能参与性腺分化的Frizzleds受体做初步探究。我们的结果表明大多数frizzleds基因的单个突变并不能导致斑马鱼雌雄比例的异常,而fz2或fz7a的单一突变下,杂合体自交后代的雄鱼数量却远远高于雌鱼数量。通过nanos3(nos)原位杂交,我们推测frizzleds突变可能通过影响原生殖细胞(PGC)进而影响斑马鱼的性腺分化,导致雌雄比例的异常。并且,我们认为各frizzleds之间可能存在相互补偿,但fz2,fz7a在斑马鱼的性别决定中发挥主要作用。 另外,我还参与了斑马鱼一号染色体全基因敲除工作,应用CRISPR/Cas9技术基本完成了我分配的任务,即5个基因的敲除工作。