胶体金免疫层析法检测乳中大肠杆菌O₁₅₇:H₇和乳源蛋白含量具有快速、灵敏、可用于现场检测等优点，对乳品的掺假及安全性检测具有重要意义，本课题对柠檬酸钠还原法、抗坏血酸还原法制备平均粒径为20nm的胶体金颗粒的条件进行了优化，并对两种方法制得的胶体金进行了抗体标记比较研究，综合考虑后得出最佳的胶体金制备条件及方法，接着通过试验确定了试纸条的各固相组成材料，最后研究、制备了大肠杆菌O₁₅₇:H₇和牛乳源蛋白β-酪蛋白胶体金免疫层析试纸条，并对试纸条的性能进行测定,证实可用于脱脂乳中大肠杆菌O₁₅₇:H₇和乳源蛋白的检测分析。特异性多克隆抗体的制备：以大肠杆菌O₁₅₇:H₇菌体和牛乳源蛋白β-酪蛋白（β-CN）、α-乳白蛋白（α-LA）为抗原，分别免疫新西兰大白兔，获得抗血清，分级盐析（50%、40%、33%）粗分离抗血清中抗体，再用蛋白A亲和色谱柱对抗体进一步纯化，SDS-PAGE检测结果显示抗体纯度达到90%以上。胶体金制备方法的确定：采用柠檬酸钠还原法、抗坏血酸还原法制备平均粒径为20nm的胶体金颗粒，对还原剂加入量、加热时间进行优化，得出两种方法的最佳制备条件为：100ml0.01%四氯金酸溶液中，1%柠檬酸钠的添加量为1.5ml，加热时间为10min，1%抗坏血酸添加量为2.0ml，加热时间为5min。制备的胶体金颗粒进行抗体标记比较研究，柠檬酸钠还原法、抗坏血酸还原法的最佳标记pH均是8.0，最佳抗体标记量前者（26μl/ml）低于后者（65μl/ml），且ELISA检测标记抗体活性，后者较高，但由于抗坏血酸溶液易氧化，制备胶体金颗粒重现性不好，影响实验结果，最后选择柠檬酸钠还原法为本实验胶体金制备最佳方法。大肠杆菌O₁₅₇:H₇和牛乳源蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制：1)试纸条固相组成材料的确定：以牛β-CN胶体金免疫层析试纸条为代表，对试纸条固相组成材料进行筛选，最后确定Millipore135s、玻璃纤维素膜SB06、聚酯纤维素膜VL98、吸水纸S*27为免疫层析试纸条层析用膜。2)大肠杆菌O₁₅₇:H₇胶体金免疫层析试纸条的研制：通过实验确定试纸条上各部分处理如下：免疫胶体金用0.01M pH7.4PBS按1:1倍稀释后固定于经0.01M pH7.4的PBS（含1%BSA、0.1%Tween20）预处理的玻璃纤维素膜上作为金标垫，硝酸纤维素膜上抗O₁₅₇:H₇IgG（T线）、羊抗兔IgG（C线）分别按500μg/ml、100μg/ml的浓度进行包被，再用0.01M pH7.4的PBS（含1%BSA）进行封闭后用0.01MpH7.4的PBS（含1%BSA、0.1%Tween20）洗涤烘干，硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫、吸水纸依次粘贴于PVC底板上组装成试纸条。其对大肠杆菌O₁₅₇:H₇纯菌液及人工模拟染菌样品的检测灵敏度均为105cfu/ml，可用于实际样品检测，而且特异性、重复性好，在4℃可放置90天。3)牛乳源蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制：通过实验确定β-CN胶体金免疫层析试纸条上玻璃纤维素膜经预处理后将免疫胶体金按1:0.5倍稀释后固定作为金标垫，硝酸纤维素膜上抗β-CN IgG（T线）、羊抗兔IgG（C线）均以200μg/ml的浓度进行包被，最后组装成试纸条。对β-CN标准溶液检测灵敏度为31.25μg/ml，对水稀释脱脂牛乳检测灵敏度为37.5μg/ml，可用于脱脂乳中β-CN含量测定，检测重复性好，4℃可放置90天，但对α-CN检测呈弱阳性。本课题研制的大肠杆菌O₁₅₇:H₇胶体金免疫层析试纸条为该菌的半定量、定量检测做好了实验铺垫，β-CN胶体金免疫层析试纸条为乳中蛋白含量测定开辟了新途径，为进一步研究以乳源蛋白含量为标准进行乳品掺假检测奠定了基础。