论文部分内容阅读
尿中腺苷(Adenosine)可以作为癌症或其他疾病潜在的生物标志物，研究发现，肿瘤细胞的快速增殖可导致腺嘌呤核苷酸降解，从而使腺苷的产生和排出增多，这又促进肿瘤的快速生长，使腺苷在体内蓄积。另外，腺苷是一种重要的内源活性物质，在外周和中枢神经系统、免疫系统及心血管系统起重要作用。因此，检测尿中腺苷的含量对恶性肿瘤的早期诊断、预后监测等方面具有实际意义。第二章，建立一种非标记孔雀石绿-核酸探针共振光散射法检测尿中腺苷的新方法。设计的核酸探针呈发夹结构，在腺苷存在的条件下，腺苷与核酸探针的适体部分结合，核酸探针的构象发生改变，生成带有单链DNA片段的G-四聚体结构，它与孔雀石绿结合后使体系的共振光散射强度增强。固定已优化条件，腺苷浓度在7.5×10-11~2.2×10-9mol·L-1范围与ΔI呈良好的线性关系，线性方程为I=18.9c (×10-10mol·L1)+16.5，r=0.9975，检出限为2.3×10-11mol·L-1。该方法操作简便，灵敏度高，已用于尿样中腺苷的检测。第三章，基于核酸探针构象转变形成具有部分单链DNA的G-四聚体结构，它与孔雀石绿作用，使体系的吸光度增强，据此建立了分光光度法检测尿中腺苷的新方法。腺苷浓度在5.2×10-10~1.8×10-8mol·L-1范围与A/A0呈良好的线性，线性方程为A/A0=1.04c (×10-7mol·L-1)+1.04，r=0.9976，检出限为1.6×10-10mol·L-1。该方法简便、快速，选择性好，没有昂贵的仪器和样品预处理，用于尿样中腺苷的测定，结果满意。第四章，应用Primer premier6.0和RNAstructure预测了核酸适体探针呈发夹型二级结构，通过金纳米比色法、TMB-AuNPs-Hg2+模拟酶催化法、NMM共振光散射与荧光法和圆二色谱法探讨了核酸探针、腺苷和孔雀石绿的反应机制，实验结果证实了我们的假设，为扩展核酸适体探针的应用奠定了理论基础，提供了实验依据。