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本研究旨在观察和分析寿光鸡早期胚胎各发育时期原始生殖细胞(PGCs)的形态、迁移和分布情况,为寿光鸡遗传资源的保存、生殖腺嵌合体以及转基因鸡的构建奠定理论和实践基础。本研究用常规石蜡切片,经PAS单一染色、PAS-苏木精复染或苏木精-伊红(HE)复染,对孵化1至8天的各期鸡胚PGCs的形态、迁移和分布进行了系统的观察。结果如下:
1.PGCs形态学特点
生殖新月区PGCs呈不规整的圆形或椭圆形,细胞核为圆形或卵圆形,偏于细胞一侧。细胞质内含大量的糖原。细胞直径为10~22.5μm,长轴为15~22.5μm,短轴为10~15μm,直径平均为11.8±2.69×16.5±1.97μm。细胞核直径平均为7.5±0.6μm。
血液PGCs呈圆形,细胞核呈圆形,偏于细胞一侧。糖原颗粒相比生殖新月期减少。细胞直径为10~12.5μm,平均为11.5±1.2μm,细胞核直径平均为7.5±0.6μm。
性腺PGCs呈圆形或卵圆形,有伪足,其胞核呈圆形或椭圆形,偏向细胞的边缘。胞质着色很淡,糖原颗粒更加减少。细胞直径为10~15μm,平均直径为12.75±1.46μm,细胞核直径平均为7.5±0.6μm。
2.PGCs分布特点
孵化19~22h(5期)胚胎,PGCs主要聚集于生殖新月区;孵化29~33h(9期)胚胎,PGCs分布在胚盘明区血管中;孵化40~45h(11期)首次在胚体的卵黄静脉入口处和头部观察到PGCs,PGCs开始进入胚体;孵化48~55h(13~15期)胚胎,PGCs聚集于胚体的心脏、大血管及头部间充质血管;孵化72h(18期)胚胎,PGCs大量迁移至生殖嵴处。孵化3.5~5d胚胎,生殖嵴PGCs的数量逐渐增多,糖原颗粒逐步减少;孵化第6d胚胎,性腺初具卵巢特征;孵化的第7d,卵巢或睾丸的分化进一步明显,PGCs胞质内糖原颗粒基本消失。
这些结果表明,PGCs在孵化33h时已开始从生殖新月区进入卵黄囊血管的迁移;在孵化40h已开始进入胚体;孵化72h时已开始迁入生殖嵴,3.5~5d内是PGCs迁移的最高时期。因此,采集PGCs的最佳时期为:孵化19~22h生殖新月区,孵化48~55h的血管中和孵化4~5d的生殖嵴中。