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造血干细胞移植是目前唯一能根治重型β地中海贫血的方法，移植排斥是主要并发症和影响地中海贫血移植成功的最大障碍之一。Pesaro分度为Ⅲ度的重型β地中海贫血患者，异基因造血干细胞移植的排斥率达30﹪。近年来的研究发现，可能引起排斥的相关因素包括：移植前多次输血、供受者HLA相合程度、移植前疾病状态、预处理的方案、造血干细胞的种类等。而免疫介导的移植排斥是主要原因，但排斥的机制尚未十分清楚。本研究通过测定重型β地中海贫血和急性白血病患儿预处理前后外周血中CD3<+>、CD3<+>CD4<+>、CD3<+>CD8v、CD19<+>、CD3<,->CD56<+>细胞比率及预处理前后血清中白介素～2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-12(IL-12)的水平，并以同期进行移植的急性白血病患儿作对照，结合临床移植效果，以探讨预处理前后免疫状态与地中海贫血移植排斥之间的关系。
研究目的：
在采用同一种移植方式，HLA相合程度、预处理方案及植入细胞数均相同情况下，β地中海贫血与急性白血病患者造血干细胞移植植入率有较大的差异。一般认为β地中海贫血的高排斥率与β地中海贫血长期输血所致机体高致敏状态有关。本研究通过比较地中海贫血与急性白血病患儿造血干细胞移植预处理前后的免疫状态，分析其与移植排斥之间的关系。
1.采用流式细胞仪测定重型β地中海贫血及急性白血病患儿异基因造血干细胞移植预处理前后CD3<+>、CD3<+>CD4<+>(简称CD4<+>)、CD3<+>CD8<+>(简称C08<+>，)、CD19<+>、CD3<->CD56<+>(简称CD56<+>)细胞百分比；采用ELISA法测定重型B地中海贫血及急性白血病患儿预处理前后的细胞因子IL-2、TNF-α、IL-12水平。
2.分析预处理前后免疫功能和移植排斥的关系。
材料和方法：
1.材料
人细胞因子IL-2、TNF-α、IL-12 ELISA试剂盒；鼠抗人IgGl FITc/IgG2aPE，CD3 FITC，CD45 FITC，CD4 PE，CD8 PE，CD19 PE，CC356 PE；健康儿童外周血；重型β地中海贫血和急性白血病患儿外周血。
2.方法
2.1造血干细胞移植病例资料重型β地中海贫血(简称β地贫)组共23例，男13例，女10例，其中2位女性β地贫患儿在第一次移植失败后行二次移植，共进行25例次移植。急性白血病组11例，男7例，女4例。
2.2免疫功能的检测
2.2.1 标本采集移植患者分别于预处理前(-10天)，预处理后(-5天)早晨空腹时采集用EDTA抗凝的新鲜外周血标本后即检测CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>、CD56<+>细胞百分比；于预处理前(-10天)、预处理后(0天)早晨空腹时采集外周血标本，分离血清后-20℃保存用作检测细胞因子；健康儿童按同样条件采集。
2.2.2外周血CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>、CD56<+>细胞百分比检测采用双色免疫荧光分析法，用流式细胞仪分别检测β地贫、急性白血病患儿预处理前后的CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>、CD56<+>细胞百分比；健康儿童做正常对照。
2.2.3细胞因子检测血清37℃水浴融解后，采用ELISA方法检测β地贫、急性白血病患儿预处理前后的血清IL-2、TNF-α、IL-12水平；应用酶标仪测量OD<,450>值，查出相应的浓度。健康儿童做正常对照。
2.3统计分析
数据用x±s表示，SPSS11.0软件进行统计分析，β地贫、急性白血病两组间的比较采用两独立样本的T检验，同一组患儿预处理前后比较采用配对T检验，计数资料采用ζ<2>。检验和Fisher精确概率检验法。P<0.05为具有统计学意义，P<0.01为具有显著性统计学意义。
结果：
1.植入情况
11例急性白血病患儿全部获得稳定植入；25例次β地贫患者，稳定植入15例次，8例次排斥，2例次无法判断植入情况(1例+11天死亡，1例在"无髓期"因严重感染而回输自体外周血造血干细胞，移植后仍为β地贫)。急性白血病组植入率100﹪，排斥率0﹪，而β地贫组植入率65.2﹪，排斥率34.8﹪，β地贫组排斥率高于急性白血病组，有统计学意义(P<0.05)。
2.流式细胞仪免疫表型检测结果
2.1预处理前CD4<+>细胞百分比，β地贫组高于急性白血病组(P=0.016)；预处理前、后CD8<+>细胞百分比，β地贫组均高于急性白血病组(P均<0.05)；预处理后β地贫组CD19<+>细胞百分比高于急性白血病组(P<0.01)。
2.2急性白血病组预处理后CD56<+>细胞比率较预处理前显著降低(P=0.005)；CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>细胞百分比，预处理前后无差异。
2.3 β地贫组预处理后CD56<+>细胞比率较预处理前升高(P<0.05)；CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>细胞百分比，预处理前后无差异。
2.4预处理前CD56<+>细胞百分比，β地贫排斥组高于β地贫植入组(P=0.0049)。
2.5 B地贫排斥组预处理后CD56<+>细胞比率较预处理前增高(P<0.05)；而CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>细胞百分比无差异。
2.6 β地贫植入组预处理前后CD3<+>、CD4<+>、CD8<+>、CD19<+>、CD56<+>细胞百分比无差异。
3. 细胞因子检测结果
3.1预处理前后v地贫、急性白血病患儿血清IL-2、TNF-α水平均高于正常儿童，IL-12水平与正常儿童无差异。
预处理前后血清TNF-α水平，β地贫组均高于急性白血病组(P<0.05)。
3.2预处理前、后血清TNF-α水平，β地贫排斥组均高于β地贫植入组；IL-2、IL-12无差异。
结论：
一、11例急性白血病患者全部植入，植入率100﹪；25例次β地贫移植，稳定植入率65.2﹪，排斥率34.8﹪，β地贫移植排斥率显著高于急性白血病。
二、重型β地中海贫血、急性白血病患儿预处理前后存在不同的免疫功能异常。
1.预处理前、后CD3<+>CD8<+>细胞百分比，β地贫均高于急性白血病；β地贫预处理后CD3<->CD56<+>显著升高，而急性白血病显著降低。提示急性白血病、β地贫不同的移植排斥率可能与CD3<+>-CD8<+>T细胞及CD3<->CD56<+>NK细胞有关。
2.预处理前CD3<->CD56<+>细胞百分比，β地贫排斥组高于植入组。β地贫排斥组预处理后CD3<->CD56<+>细胞比率较预处理前增高，而β地贫植入组预处理前后CD3<->CD56<+>细胞比率无差异。CD3<->CD56<+>NK细胞可能与β地贫移植排斥有关。检测CD3<->CD56<+>细胞百分比可做为预测排斥的指标。
3.预处理前、后血清中TNF-α水平，β地贫均高于急性白血病。β地贫排斥组预处理前后TNF-α水平均高于地贫植入组。血清中TNF-α水平可能与排斥有关。检测血清中TNF-α水平可做为预测排斥的指标之一。