从青霉素菌丝体中提取蛋白、麦角固醇、壳聚糖的工艺研究

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青霉素菌丝体是青霉素生产时提取发酵液后产生的废渣。其中含有丰富的蛋白、麦角固醇和壳聚糖等物质。若能将其各有效成分分离回收,不仅可以解决工业废物的治理问题,还具有很高的开发利用价值。本文研究了青霉素菌丝体中蛋白、麦角固醇、壳聚糖的提取工艺,并通过纯化得到了高纯度的麦角固醇,为菌丝体的综合再利用提供了一种新途径。本研究采用碱提酸沉法提取菌丝体中的蛋白。首先将青霉素湿菌丝体的pH调至9,在40℃的水浴中搅拌加热60min;再用盐酸将提取液pH调至4,经沉淀、干燥得蛋白。该工艺下蛋白提取率为90.4%,纯度为80.5%,可作为高品质的饲料添加剂。本研究采用直接加碱的方法对麦角固醇进行皂化,通过一系列的实验证明:选用NaOH为皂化剂;当皂化温度为90℃、皂化时间为2h、料液比[m(提完蛋白后的渣)∶m (NaOH溶液)]为1:9、NaOH溶液浓度为15%时,麦角固醇的提取率最高,可达到0.82%(占菌丝体干重的百分含量)。在提取剂的选择上,实验选取乙醇作为提取剂。为了提高麦角固醇的纯度,实验采用结晶-酶解-再结晶的方法进行纯化。实验结果显示:乙醇提取液结晶起始浓度为0.3%±0.02%时,结晶的收率和纯度最高,可得到的结晶收率为83.6%,纯度为45.5%。当结晶降温速度控制在10℃/h,降温至5℃,养晶时间为12h,可得到较多和较好的晶型。在酶解过程中对用酶种类和酶解条件进行了筛选和正交试验,实验证明酶解最佳条件为:选用复合蛋白酶,在温度为55℃,pH为7,加酶量为1%,时间为1h的条件下进行酶解效果最佳。此条件下麦角固醇的纯度为75%。二次结晶是控制麦角固醇纯度的关键步骤。实验结晶溶剂选用水和乙醇的混合溶剂。通过实验得出:每1g酶解后的角固醇粗品用400mL的热乙醇溶解,再逐渐加入210mL己预热的蒸馏水,滴加少量乙醇使溶液刚好变澄清,以10℃/h的降温速度缓慢降温至5℃,养晶12小时,可得到纯度为95.8%的麦角固醇,得率为75.4%。本研究采用微波和碱相结合的方法对甲壳素进行脱乙酰化。通过实验筛选出微波法提取壳聚糖的最优条件为:微波功率450W,微波时间25min,碱液浓度25%,料液比1:10(mL∶g)。在此条件下壳聚糖的脱乙酰度可达到90%,粘度为2.4Pa·s,提取率为12.4%(占菌丝体干重的百分含量)。该工艺条件具有产品粘度高、高效、节能、省时、操作简单的优点,是理想的提取壳聚糖的方法,适合于工业化生产。
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