肝内胆管细胞癌是一种源于肝内胆管上皮细胞的原发性腺癌，发病率在原发性肝癌中次于肝细胞肝癌居第二位。虽然肝内胆管细胞癌较肝细胞癌少见，但近十年来发病率有所上升。目前手术切除是治疗肝内胆管细胞癌的首选及最有效的方法，但由于早期诊断困难、手术切除率低和术后容易转移复发，患者预后情况在过去十年内没有明显提高。因此，研究引起肝内胆管细胞癌发生及促进肿瘤转移复发的关键因子在治疗肿瘤及改善预后方面有着重要意义。　　钙蛋白酶是一种保守的半胱氨酸蛋白酶，催化众多特殊基质调控蛋白水解。钙蛋白酶活性与细胞骨架重构，胞内信号转导，细胞凋亡和细胞存活等一系列基本生理过程密切相关，其表达在肿瘤发生过程中也产生明显改变。研究发现钙蛋白酶小亚基Capn4在维持钙蛋白酶结构及活性过程中发挥重要作用，我们先前的实验也证实了Capn4与原发性肝细胞癌的侵袭复发密切相关，且可作为独立的预测预后指标。　　本研究检测了Capn4在肝内胆管细胞癌患者肿瘤组织和癌旁组织中的表达。利用组织芯片技术分析验证Capn4表达与临床病理特征的关系及其预后价值。通过RNA干扰的方法抑制肝内胆管细胞癌细胞系Capn4的表达，观察其与肿瘤侵袭，迁移和增殖的关系，并进一步研究Capn4对MMP2表达的影响。对Capn4在肝内胆管细胞癌的侵袭与转移中的作用进行初步探讨。　　第一部分 Capn4在肝内胆管细胞癌中表达升高　　目的:研究Capn4在肝内胆管细胞癌和对应癌旁组织中的表达差异，分析其与肝内胆管细胞癌发生的关系。　　方法:应用qRT-PCR、western blot及免疫组化方法检测Capn4在肝内胆管细胞癌患者肿瘤组织与对应癌旁组织中的表达差异，并进一步检测肝内胆管细胞癌早期复发与未复发患者的肿瘤组织中Capn4表达情况。　　结果:qRT-PCR、western blot及免疫组化结果显示Capn4在肝内胆管细胞癌患者肿瘤组织中的表达量高于对应癌旁组织，两者间差异有显著性（p＜0.05）。早期复发患者Capn4表达较未复发患者明显升高（p＜0.05）。　　结论:Capn4在肝内胆管细胞癌肿瘤组织及早期复发患者的肿瘤组织中表达升高，可能在肿瘤发生与复发过程中发挥重要作用。　　第二部分 Capn4与肝内胆管细胞癌临床病理特征的关系及诊断预后的价值　　目的:检测Capn4在肝内胆管细胞癌组织中的表达，研究其与肝内胆管细胞癌临床病理学特征的关系及预后意义。　　方法:应用免疫组化方法检测140例肝内胆管细胞癌患者病理组织中Capn4表达，SPSS16.0统计分析Capn4与临床病理特征及预后的关系。　　结果:Capn4高表达与肝内胆管细胞癌患者的肿瘤淋巴结转移及TNM分期相关（p＜0.05）。Capn4高表达组术后总体生存率明显低于Capn4低表达组(p＜0.05)，而累计复发率明显高于Capn4低表达组（p＜0.05）。单因素及多因素分析显示Capn4表达是患者总体生存率和累计复发率的独立预后因子，且在有淋巴结转移的患者中仍有预后价值。　　结论:Capn4与肝内胆管细胞癌的淋巴侵袭转移及肿瘤TNM分期相关，具有预后价值。　　第三部分下调Capn4表达对肝内胆管细胞癌细胞侵袭转移的影响及其与MMP2的关系　　目的:研究Capn4与肝内胆管细胞癌细胞侵袭转移能力及MMP2的关系。　　方法:应用RNA干扰的方法下调Capn4在肝内胆管细胞癌细胞株HCCC-9810与QBC939中的表达，经qRT-PCR、western blot验证抑制效率后，应用划痕试验检测细胞迁移能力变化，transwell试验检测细胞侵袭能力变化，MTT试验检测细胞增殖能力变化，并进一步研究干扰Capn4表达对MMP2表达的影响。　　结果:RNA干扰后细胞株Capn4表达明显下调。在HCCC-9810与QBC939中Capn4干扰组细胞侵袭迁移能力明显减弱，增殖能力受Capn4表达水平影响较小（p＞0.05）。MMP2表达与Capn4表达呈正相关。　　结论:Capn4表达与肝内胆管细胞癌细胞的侵袭迁移能力及MMP2表达呈正相关。