槐杞黄对小鼠IgA肾病的治疗作用及机制探讨

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第一部分槐杞黄对小鼠IgA肾病的治疗作用目的:探讨槐杞黄对小鼠IgA肾病(IgA nephropathy)的治疗作用。方法:①采用口服牛血清白蛋白(Bovine serum albumin, BSA)联合尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B (Staphyloentero-toxinB, SEB)的方法建立小鼠IgAN模型,并鉴定造模是否成功。②36只清洁级雄性BABL/c小鼠随机分为对照组、IgAN模型组、槐杞黄治疗组。于第8周开始,治疗组定时给予槐杞黄4g/kg.d, IgAN模型组和空白对照组定时予生理盐水灌胃。观察小鼠一般情况和小鼠体重变化情况,在实验的第7周末,第10周末和第12周末(处死前)三个时间段,收集24h尿液进行尿蛋白定量。处死前采血检测小鼠肾功能和血清白蛋白,取小鼠肾组织进行IgA免疫荧光检测,肾组织石蜡切片行HE, PAS染色,在光镜下观察病理改变。结果:①IgAN模型小鼠在第7周出现蛋白尿,并出现了IgA免疫荧光沉积,系膜增生的病理改变,造模成功。②一般情况观察:模型小鼠出现不同程度食欲差、毛色杂乱,体重不增,部分小鼠体重下降,11周后各组小鼠食欲与毛色有改善。各组之间的体重及体重变化差异无显著性(P>0.05)。③蛋白尿:IgAN模型组第8-12周蛋白尿持续升高,与正常对照组比较有明显差异(P<0.01);槐杞黄组经治疗后蛋白尿情况均有不同程度的缓解,与IgAN模型组比较有明显差异(P<0.05)。④血清白蛋白:模型组小鼠血清ALB含量(31.53+0.90g/L)较对照组(33.80±0.26/L)显著下降(P<0.01);经槐杞黄治疗4周后,血清ALB含量(33.98±0.42g/L)较模型组明显上升(P<0.01)。⑤血清BUN、Cr:对照组、模型组、槐杞黄治疗组之间血清BUN、Cr的差异无统计学意义(P>0.05)。⑥IgA免疫荧光改变:对照组小鼠肾小球系膜区和毛细血管壁未见IgA沉积;模型组小鼠肾小球系膜区和毛细血管壁有较强的颗粒状或团块状IgA沉积;槐杞黄治疗组IgA沉积的程度各不相同,但沉积程度较模型组减轻。⑦光镜病理学改变:IgAN模型组小鼠可见较显著的肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多,肾小球体积增大,系膜细胞增多,基质中重度增生,部分肾小球可见囊腔粘连,部分肾小球毛细血管袢受压,开放欠佳;而对照组小鼠肾小球未见明显异常。槐杞黄治疗组肾小球系膜细胞增生和系膜基质增多情况较模型组明显减轻。结论:①口服BSA加上静脉注射SEB感染的复合性方法可以成功复制小鼠实验性IgAN模型,动物耐受性良好。②槐杞黄可以通过减少IgAN小鼠的蛋白尿,升高血清白蛋白,减少肾小球系膜增生和IgA在肾小球的沉积,从而达到治疗IgAN的目的。第二部分槐杞黄治疗小鼠IgA肾病的机制探讨目的:了解槐杞黄对细胞因子分泌的影响,探讨槐杞黄治疗IgAN的作用机制。方法:①采血并用ELISA方法检测小鼠血清IgA水平。②取小鼠的脾脏,计算脾指数。③分离、培养小鼠脾细胞,ELISA方法检测脾细胞悬液上清液中IL-2、IL-4、INF-γ浓度,计算每组小鼠INF-γ/IL-4比值,以评估Th1/Th2失衡的情况。结果:①血清IgA水平:模型组血清IgA(449.30±27.27μg/L)较对照组(253.38±13.61μg/L)显著上升(P<0.01)。经槐杞黄治疗后,小鼠血清IgA(319.52±7.85μg/L)呈下降趋势,显著低于模型组(P<0.05);但仍高于正常对照组,有统计学意义(P<0.05)。②小鼠脾指数:模型组的脾指数与对照组相比,没有明显的升高或降低,差异无统计学意义。槐杞黄组脾指数数值虽然高于对照组和模型组,但差异无统计学意义(均P<0.05)。③小鼠脾脏淋巴细胞培养上清液中的IL-2水平:模型组的小鼠脾脏淋巴细胞IL-2的分泌(331.81±0.52pg/ml)较对照组小鼠(340.32±2.63 pg/ml)降低,但差异无统计学意义(P>0.05);槐杞黄治疗后,小鼠脾脏淋巴细胞的IL-2的分泌(346.05±1.93pg/ml)较模型组显著增加(P<0.05)。④小鼠脾脏淋巴细胞培养上清液中的IL-4水平:模型组的小鼠脾脏淋巴细胞IL-4的分泌(151.82±1.06 pg/ml)较对照组小鼠(117.34±0.51 pg/ml)显著升高,有统计学意义(P<0.01);槐杞黄治疗后,小鼠脾脏淋巴细胞的IL-4的分泌(149.94±1.78 pg/ml)较模型组略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05),而且仍明显高于对照组(P<0.01)。⑤小鼠脾脏淋巴细胞培养上清液中的INF-γ水平:模型组的小鼠脾脏淋巴细胞INF-γ的分泌(447.38±20.25 pg/ml)较对照组小鼠(871.37±8.62 pg/ml)明显降低,有显著统计学意义(P<0.01);槐杞黄治疗后,小鼠脾脏淋巴细胞的INF-γ的分泌(1380.65±8.81 pg/ml)明显上升,显著的高于模型组(P<0.01),甚至明显高于对照组(P<0.01)。⑥小鼠脾脏淋巴细胞培养上清液中的INF-γ/IL-4的比值:模型组的小鼠脾脏淋巴细胞INF-γ/IL-4的比值(3.14±0.41)较对照组小鼠(7.42+0.05)明显降低,Thl细胞因子明显减少,呈Th2极性变化,有显著统计学意义(P<0.05)。槐杞黄治疗后,小鼠脾脏淋巴细胞的INF-γ/IL-4的比值(9.21±0.05)明显上升,显著的高于模型组(P<0.01),说明槐杞黄有很强的诱生Thl细胞因子的作用。结论:①槐杞黄可以降低IgAN小鼠血清IgA水平,从而减少IgA在肾小球的沉积,达到治疗的效果。②槐杞黄后对脾指数影响不大。③槐杞黄可以使IL-2和INF-γy明显上升,INF-γ/IL-4的比值则明显上升,从而纠正IgAN的Th1/Th2的失衡,将Th2极性转为Th1极性。
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