吴茱萸碱对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭和迁徙的影响研究

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目的:探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞株(Hep G2细胞)增殖、侵袭及迁徙能力的影响及进一步探究吴茱萸碱对人肝癌Hep G2细胞的可能作用机制。方法:以人肝癌Hep G2细胞为受试细胞,实验设置正常对照组、吴茱萸碱5.0、12.5、25.0、50.0、100.0μmol/L处理组,噻唑蓝法(MTT)检测肝癌Hep G2细胞增殖抑制率,Transwell小室检测吴茱萸碱对Hep G2细胞侵袭以及迁徙能力的影响,划痕实验检测吴茱萸碱对Hep G2细胞伤痕愈合率的影响,集落形成实验检测吴茱萸碱对Hep G2细胞集落形成能力的影响,蛋白印迹法(Western blot)检测吴茱萸碱对Hep G2细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(Phospho-ERK1/2、p-ERK1/2)蛋白表达的影响。结果:不同药物浓度的吴茱萸碱对Hep G2细胞增殖抑制能力明显高于对照组,呈现时间-剂量依赖关系(P<0.05),即随药物浓度增加及作用时间延长抑制效果更明显;吴茱萸碱5.0、25.0、50.0μmol/L作用后,Hep G2细胞侵袭细胞数分别为32.3±1.3个、22.3±2.5个、10.6±3.7个,对照组为97.6±6.3个,差异有统计学意义(P<0.05);Hep G2细胞迁徙细胞数为57.7±3.2个、26.8±1.6个、15.4±3.9个,对照组为106.3±3.2个,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,吴茱萸碱5.0、25.0、50.0μmol/L处理组Hep G2细胞24、48小时伤痕愈合率分别为(23.31±1.03)%、(10.37±1.06)%、(7.92±1.40)%和(13.86±5.57)%、(1.78±3.08)%、(0±0)%,差异有统计学意义(P<0.05);5.0、25.0、50.0μmol/L吴茱萸碱作用Hep G2细胞集落形成数分别为147±12.1、94.3±4、0,对照组为231.3±15.4,差异有统计学意义(P<0.05;吴茱萸碱5.0、25.0、50.0μmol/L组作用Hep G2细胞24小时及30μmol/L吴茱萸碱处理Hep G2细胞24、48小时,MMP-9、PCNA蛋白的表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05),5.0、25.0、50.0μmol/L吴茱萸碱处理Hep G2细胞24小时及30μmol/L吴茱萸碱处理Hep G2细胞24、48小时后,ERK1/2蛋白的表达无明显变化,但其活化形式p-ERK1/2蛋白的表达量减少,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可明显抑制Hep G2细胞增殖、侵袭和迁徙能力,其作用机制可能与吴茱萸碱抑制ERK1/2蛋白活化,进而下调MMP-9、PCNA蛋白表达有关。
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