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目的：前期研究显示HCMV感染U251细胞后上调细胞hsa-miR-27b表达,通过生物信息学分析显示Egrailed-2(EN2)基因为hsa-miR-27b调控的靶基因之一。本研究的目的是通过实验证实hsa-miR-27b靶向调控EN2,为进一步阐明miRNA表达改变在HCMV感染导致神经系统发育畸形中的作用提供实验基础。方法：①采用生物信息学方法分析hsa-miR-27b靶向调控EN2的靶点位置和EN2的生物学功能。②构建hsa-miR-27b表达载体LV3-HmiR-27b,将LV3-HmiR-27b表达载体转染HEK-293T细胞,转染后24h和48h,用Real-time RT-PCR检测其成熟体]HmiR-27b的表达水平。③构建EN2-mRNA-3’UTR正义链和反义链表达载体Psi-EN2-UTR-S和Psi-EN2-UTR-AS。将LV3-HmiR-27b和Psi-EN2-UTR-S/AS共转染HEK-293T细胞,转染后48h检测双荧光素酶活性值,验证靶点的正确性。④通过嘌呤霉素筛选LV3-HmiR-27b质粒稳定转染的U251细胞,Western blot技术检测EN2蛋白表达水平。结果：(DMicroRNA靶点预测数据库包括Targetscan、 miRanda、PicTar和DIANA-microT均能预测到hsa-miR-27b与EN2-mRNA-3’UTR有互补结合区,包含3个靶点。1niRo数据库联合靶点数据库分析EN2参与神经元、中脑和间脑的发育。GO数据库对EN2基因分析显示EN2主要分布于细胞核内和细胞膜,参与神经元、中脑、间脑以及多细胞机体的发育,且正调控RNA聚合酶II启动子的表达。②成功构建了含有双荧光素酶报告基因的表达载体Psi-EN2-UTR-S/AS。③成功构建了Hsa-miR-27b前体表达载体LV3-HmiR-27b, Real-time RT-PCR检测显示,其成熟体在HEK-293T细胞中能高水平表达,其表达水平比空白对照组高20倍。④双荧光素酶实验证明EN2是Hsa-miR-27b的靶基因。⑤通过嘌呤霉素成功筛选出LV3-HmiR-27b质粒稳定转染的U251细胞：与空白对照组和阴性对照组(shNC)细胞比较,LV3-HmiR-27b组U251细胞呈现细胞形态学改变,主要表现为细胞变细长,且神经细胞突起数量增多；Western blot分析显示EN2蛋白的表达水平下降。结论：EN2为hsa-miR-27b调控的靶基因,hsa-miR-27b能下调U251细胞EN2蛋白的表达水平。HCMV可能通过上调hsa-miR-27b而下调EN2的蛋白表达这一机制,影响神经系统发育,导致畸形的发生。