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实验目的肝细胞癌(hepatic cell cancer,简称HCC),是我国乃至世界常见恶性肿瘤之一,其死亡率在全世界恶性肿瘤中排名第三位,且其发病率还在逐渐上升。随着预防、诊断、治疗等技术的不断进步,对HCC的处理水平逐渐提高,据调查显示,在1992年-2004年间,HCC的2-4年生存率提高了两倍。然而,总体上,HCC一年生存率仍然低于50%。随着人类对疾病的研究进入分子水平,人们发现许多疾病的发生存在细胞分子上的变化。转录因子CUTL1,又被称为CDP、cut、Cux等,均为CCAAT置换蛋白,属于同源结构域转录因子家族,在进化上高度保守。经研究表明,CUTL1在调节细胞分化、增殖及细胞周期进展等生物学过程中发挥了重要作用,且相关研究表明,CUTL1参与了结肠癌、乳腺癌、子宫肌瘤、胰腺癌等恶性肿瘤的发生发展。本文基于此,初步研究了CUTL1的表达在肝癌及癌旁中是否有差异性,并对大样本肝癌资料进行分析,研究了CUTL1的表达与肝癌的临床病理因素及预后的关系,探讨了CUTL1对肝癌患者生存期的影响。实验方法1、收集2013年2月至2013年7月在中南大学湘雅医院手术切除的36例原发性肝细胞癌癌组织及其配对的癌旁组织,组织收取后立即放入液氮罐中,并随后转入—80℃冰箱冷冻保存。取新鲜冰冻组织行Western-blot及实时荧光定量PCR实验,检测两种组织中CUTL1在mRNA及蛋白水平上的量的表达情况,并分析了mRNA及蛋白表达间的相关性。并将癌组织中CUTL1蛋白量与HCC患者临床病理资料相联系,分析它们的相关性；2、收集了中南大学湘雅医院2007年1月至2008年1月部分肝癌患者手术切除石蜡标本136例,全部病例均经病理检查证实为肝细胞癌,并在入组前进行了病理复查。对该136例标本中的CUTL1分子进行免疫组织化学检查,研究CUTL1蛋白在肝癌中的表达情况,并分析了CUTL1蛋白表达与肝癌临床病理因素关系,最后研究了CUTL1阳性表达对肝癌患者无瘤生存期及总生存期的影响及对肝癌患者预后的风险性的评估。实验结果1、Western-blot及RT-PCR结果显示,肝癌组织中CUTL1的蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05),相关性分析显示mRNA的表达与蛋白表达之间呈正相关。癌组织中CUTL1蛋白表达量与临床病理资料相联系发现,CUTL1的表达在肿瘤多发、肿瘤直径大、有血管侵犯及高的Edmondson分级患者中明显高于肿瘤单发、瘤体直径小、无血管侵犯及低的Edmondson分级的患者(P<0.05)；2、免疫组化分析显示,CUTL1蛋白表达主要存在于细胞核中。肝癌组织中的CUTL1蛋白表达量与肝癌的临床病理指标的相关性分析示其水平与肿瘤直径、血管侵犯及Edmondson分级明显正相关(P<0.05)。而与患者的年龄、性别、肝硬化与否、肿瘤数目及AFP无明显相关(P>0.05)；3、生存分析显示CUTL1高表达肝癌患者无瘤生存期及总生存期明显缩短(P<0.05), CUTL1的表达与肝癌患者的预后呈负相关。Cox风险比例分析发现CUTL1对肝细胞肝癌患者总生存期有影响,是独立的风险因素(P<0.05)。结论1、在肝细胞癌组织中,CUTL1mRNA及蛋白表达明显增加,提示CUTL1可能为一种癌基因,促进了HCC的发生发展。2、进一步进行统计学分析发现,CUTL1的表达在肿瘤多发、肿瘤直径大、有血管侵犯及高的Edmondson分级患者中明显增高,提示CUTL1可能有促进HCC的肿瘤生长、侵袭及转移以及去分化等作用。3、生存分析及Cox回归分析提示,CUTL1阳性表达是肝癌患者不良预后的重要因素,因此,CUTL1可作为判断肝癌患者预后的指标之一。