论文部分内容阅读
肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是我国最常见的恶性肿瘤之一，由于临床缺乏有效的预防、检测及治疗手段，大多数患者发现时已属癌症中晚期，且预后较差，因此寻找可靠的生物标志物用于肝癌诊断和预后判断具有重要意义。MicroRNA（miRNA）是一类内源性的，长度约为22nt的非编码功能性RNA，由于RNAase的保护作用在血清或血浆中表现出高度的稳定性。研究表明miRNA扮演着癌基因或抑癌基因的角色，并能同时调节多个基因，通过结合靶mRNA的方式参与调控肿瘤的发生发展。因此认为miRNA在肝癌和正常血清样本中呈现显著的差异表达水平，对肝癌筛查和诊断具有潜在的指示作用。本论文从杭州西溪医院共收集未经过任何化疗处理的52例肝癌血清样本和25例正常对照样本，对乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）阳性肝癌样本和正常样本各5例分别混合得到两个混合样，构建miRNA文库进行miRNA表达谱测序。通过对高通量测序所得的数据进行分析处理，共获得172条在肝癌和正常血清样本中差异表达的miRNAs，结合文献报导筛选了三条差异表达的miRNAs进行大样本量验证。相对于正常对照样本，miR-182-5p、363-3p和378a-3p在肝癌样本中显著高表达，并达到极显著水平（P<0.01），且这三条目标miRNAs也能较好地区分HBV阳性肝癌和正常样本，在临床诊断中具有广泛的科研价值和临床应用前景。为探究乙型肝炎病毒是否能够编码miRNA，与宿主mRNA靶向结合来参与病毒感染的调控机制，本论文通过Vir-Mir数据库预测乙肝病毒编码的pre-miRNAs，并结合miRNA表达谱测序和实时荧光定量PCR方法验证成熟体miRNA。结果显示HBV阳性肝癌血清样本中存在六条候选pre-miRNAs，并成功验证其中一条成熟体命名为hbv-miR-15467，为病毒性肝病的治疗策略提供了新的思路。