目的研究亚硝酸钠对睾丸支持细胞的毒性作用及分子机制，为男性不育的预防提供理论依据。方法采用冷胰蛋白酶消化法进行睾丸支持细胞的体外原代培养；MTT法测定亚硝酸钠对支持细胞的细胞抑制率，用改进寇氏法计算半数抑制浓度IC₅₀，并将其作为单细胞凝胶电泳和免疫细胞化学中亚硝酸钠作用的最高剂量，10倍稀释后分别作为中剂量、次低剂量及低剂量；应用单细胞凝胶电泳检测亚硝酸钠对睾丸支持细胞DNA的损伤作用；采用免疫细胞化学检测亚硝酸钠对睾丸支持细胞中波形蛋白表达的影响。采用SPSS13.0对所得数据进行统计分析。结果1．亚硝酸钠浓度为0.015mg／ml时即对睾丸支持细胞存在毒性作用，随着剂量增大，毒性作用逐渐增强，细胞抑制率与亚硝酸钠剂量之间存在着明显的剂量—反应关系，半数抑制浓度(IC₅₀)为1.17mg／ml，标准差为1.14mg／ml。2．亚硝酸钠浓度为0.0015mg／ml时可引起支持细胞轻度拖尾，0.015mg／ml、0.15mg／ml及1.5mg／ml剂量组则可引起明显的拖尾，且随着亚硝酸钠剂量的增加，细胞拖尾率逐渐增加；而且各剂量组的尾长、尾长动差及尾／头（长）总体之间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。3．应用免疫细胞化学技术，观察亚硝酸钠引起支持细胞中波形蛋白表达的变化，结果表明，各剂量组的平均灰度与阴性对照组的差异均有统计学意义（P＜0.05），且随着染毒剂量的增加，平均灰度逐渐降低。结论一定剂量的亚硝酸钠可以引起支持细胞DNA损伤，且随剂量增加，损伤程度加重；亚硝酸钠也可以抑制支持细胞波形蛋白的表达，从而损伤支持细胞的结构。