3.S.costaricanus SCSIO ZS0073中actinomycin D生物合成基因簇的鉴定与功能分析:　　基于同一菌株全基因组序列信息定位了长约70kb，含43个ORF的actinomycin D生物合成基因簇。通过对该基因簇内的基因进行功能注释发现其含有2个非核糖体肽合成酶编码基因acnN2，acnN3;8个吩噁嗪酮生物合成基因acnD,E,G,H,L,M,P;9个未知蛋白编码基因acnA，U1，U2，U3，U4等;2个调控蛋白编码基因acnB，acnR和2个转运蛋白编码基因acnT1，T2。为确定actmomycin D基因簇中各个基因的功能，对actinomycin D生物合成基因簇中的24个功能基因进行了敲除阻断，成功构建其双交换突变株。通过发酵培养并结合HPLC检测分析，初步推导:acnN3，acnN1为骨架生物合成基因;acnD,E,G,H,L,M,P为吩噁嗪酮前体生物合成基因;acnA，acnB为生物合成负调控基因;acnT1，acnT2为转运蛋白编码基因;acnO为生物合成正调控基因;acnU4对actinomycin D生物合成具有重要作用;acnU1，acnU2对actinomycin D生物合成无影响;同时验证了其他生物合成基因的功能。　　本研究鉴定了两个高产负调控基因acnA，acnB和两个转运蛋白编码基因acnT1，acnT2。这些研究结果为后续深入研究其代谢调控与生物合成催化机理提供了良好的借鉴与参考，同时为发掘新颖的结构类似物和代谢中间产物及构建工程菌株打下了扎实的物质基础。