IL-17对人宫颈癌细胞株HeLa体外增殖的影响及作用机制的研究

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目的:探讨白细胞介素17(interleukin17,IL-17)在人类宫颈癌发生发展中的作用,以及实现这种作用的内在机制,为宫颈癌的临床治疗提供更多的实验依据。方法:用含不用浓度IL-17(1、10、50、100ng/ml)的高糖DMEM培养基体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,然后进行如下检测:(1)培养24h后,用MTT法检测各个浓度处理组细胞的生长情况;(2)IL-17刺激经诱导凋亡的HeLa细胞24h后,流式细胞仪检测不同浓度组细胞凋亡情况;(3)IL-17刺激细胞48小时后,提取细胞内总RNA,用半定量RT-PCR法,检测各组细胞表达VEGF mRNA的情况;(4)刺激48h后,收集并裂解细胞,提取细胞内总蛋白,然后通过Western blot法检测各组中细胞VEGF蛋白的表达情况。结果:(1)IL-17刺激HeLa细胞24h后,1、10及100ng/ml浓度处理组较正常对照组(0ng/ml),细胞增殖无明显差异,但经50ng/ml IL-17刺激后的细胞增殖明显增加(P<0.01);(2)IL-17作用于经饥饿诱导凋亡的HeLa细胞24h后,50及100ng/ml浓度组细胞的晚期凋亡率跟正常对照组相比均有明显下降(P<0.01),50及100ng/ml Il-17处理组细胞的总凋亡率跟正常对照组相比较也有着明显下降(P值分别是P<0.05,P<0.01),50ng/ml IL-17浓度组的细胞的早期凋亡率相比于正常对照组来说有一定上升,但无统计学差异,100ng/mlIL-17浓度组的早期凋亡率较正常对照组下降,但差异无统计学意义;(3)IL-17作用48h后发现,50ng/ml和100ng/ml两浓度组细胞内VEGF mRNA的表达量都高于正常对照组,其中50ng/ml组最为明显(P<0.05);(4)IL-17刺激细胞48h后,细胞内VEGF蛋白的表达量均增高,以50ng/ml IL-17处理组最明显(P<0.05)。结论:(1)50ng/ml的IL-17可促进人宫颈癌HeLa细胞株体外增殖;(2)50ng/ml及100ng/ml的IL-17可抑制人宫颈癌HeLa细胞凋亡(晚期凋亡率及总凋亡率较对照组均有明显下降),且随着IL-17刺激浓度的不断增高,对HeLa细胞凋亡的抑制作用更明显,具有剂量依赖性;(3)50ng/ml的IL-17可上调人宫颈癌HeLa细胞VEGF mRNA的表达量;(4)50ng/ml的IL-17,可上调人宫颈癌HeLa细胞VEGF蛋白的表达;(5)IL-17可能通过抑制人宫颈癌HeLa细胞凋亡及上调细胞VEGF mRNA和蛋白水平的表达促进肿瘤新生血管的机制,从而实现促进肿瘤生长的作用。
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