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目的:乳腺癌是女性常见的一种高度异质性的恶性肿瘤,发病率逐年增加。三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是指肿瘤细胞膜表面缺乏雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,PR）和人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2,HER2）的一类乳腺癌,具有术后易复发、易远处转移和预后差的特点,对内分泌治疗和针对HER2的靶向治疗无效,至今仍缺乏令人满意的综合治疗方案。近年来提出的肿瘤干细胞（cancer stem cell CSC）理论认为肿瘤干细胞是恶性肿瘤的根源,因此,各种化疗药物对TNBC中肿瘤干细胞的影响至关重要,其最终可能决定着TNBC治疗的成败。目前多数研究表明CD44+CD24-/low表型的细胞是乳腺癌干细胞相关亚群。本研究观察晚期乳腺癌临床常用六种化疗药物对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的作用,并观察上述药物对乳腺癌干细胞相关亚群(CD44+CD24-/low细胞)含量变化的影响,同时检测10例晚期转移性三阴性乳腺癌患者化疗前后外周血中CD44+CD24-/low亚群的水平变化,以期为临床治疗TNBC的药物选择提供依据。方法:1体外培养人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,选用六种晚期乳腺癌临床常用化疗药物,分别为:紫杉醇（PTX）、多西紫杉醇（DOX）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、表柔比星（EPI）、长春瑞滨（NVB）、吉西他滨（GEM）。应用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay,MTT）法测定各种药物浓度为0.2、1、5倍的药物血浆峰浓度（PPC）,分别作用24h、48h和72h对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率。2将细胞随机分为对照组（正常条件下培养的MDA-MB-231细胞株）和六种化疗药物作用的实验组,每组均同时设立10个培养瓶细胞。六种化疗药物均以1倍PPC作为工作浓度,分别作用于MDA-MB-231,48小时后,观察细胞形态学变化,并将每组中5瓶细胞用流式细胞仪检测其CD44+CD24-/low细胞比例;剩余5瓶细胞在药物作用48小时后,去除药物作用,加入新的培养基,在正常培养条件下继续培养至细胞复苏,以镜下观察每瓶细胞中贴壁细胞数量约占瓶底面积的80%为标准,然后用流式细胞仪检测各组中CD44+CD24-/low细胞比例。3应用流式细胞术检测10例晚期转移性三阴性乳腺癌患者化疗前和化疗后外周血中CD44+CD24-/low细胞含量,另采集10例健康志愿者血样作为正常对照进行比较。结果:1 MTT分析结果显示,与对照组相比,PTX、DOX、EPI、5-FU、NVB、GEM在0.2、1、5倍PPC作用24、48、72小时后,对MDA-MB-231细胞增殖均有明显的抑制作用（p<0.05）,且随着药物浓度的增加,抑制率也增加。在1倍的PPC作用48小时后,对MDA-MB-231的抑制作用以PTX最为明显。2流式细胞仪检测结果显示:对照组CD44+CD24-/low细胞含量为: 86.46%±4.72%。各药于1倍PPC作用48h后的CD44+CD24-/low细胞亚群含量分别为:NVB（91.34%±4.17%）、GEM（85.43%±2.76%）、DOX（74.78%±3.98%）、PTX（71.67%±1.87%）、EPI（66.38%±3.06%）、5-FU（42.41%±5.43%）。统计结果显示NVB作用后虽能使细胞含量增加,但与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,GEM作用后未使细胞含量发生明显变化与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）,其余各组均使细胞含量减低,与对照组比较差异均有统计学意义（p<0.05）,其中以5-FU作用后减低最为明显。终止药物作用,正常条件下继续培养至细胞复苏,流式细胞仪检测的各组CD44+CD24-/low细胞含量分别为:NVB（86.46%±2.58%）、GEM（85.97%±3.80%）、DOX（75.23%±2.91%）、PTX（69.21%±5.55%）。统计结果显示NVB组CD44+CD24-/low细胞含量与正常对照相似,差异无统计学意义（P>0.05）,GEM组细胞含量与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,DOX和PTX组细胞含量低于正常,与对照组比较差异有统计学意义（p<0.05）。EPI和5-FU组细胞未恢复正常生长（重复培养3次）。3 10例患者在化疗2周期后疗效评价均为疾病稳定（SD,肿瘤均有不同程度的缩小）。10例晚期转移性三阴性乳腺癌患者外周血中化疗前和化疗后CD44+CD24-/low细胞含量分别为:54～793个/100ul和13～198个/100ul,中位数分别为:160个/100ul和48个/100ul。10例健康志愿者外周血中CD44+CD24-/low细胞含量在13～41个/100ul之间,中位数为28个/100ul。统计结果显示,转移性三阴性乳腺癌患者外周血中CD44+CD24-/low细胞含量高于健康志愿者（p<0.05）。乳腺癌患者化疗后外周血中CD44+CD24-/low细胞含量较化疗前降低（p<0.05）。结论:1六种化疗药物在0.2、1、5倍PPC作用24、48、72小时后,对MDA-MB-231细胞增殖均有明显的抑制作用,随着药物浓度的增加,抑制率增加。1倍的PPC作用48小时,对MDA-MB-231的抑制作用以PTX最为明显。2三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231中CD44+CD24-/low细胞亚群作为乳腺癌干细胞相关亚群并非对所有的化疗药物产生抵抗,化疗药物PTX、DOX、EPI、5-FU均可使其含量降低,以5-FU作用最为明显。3晚期转移性三阴性乳腺癌患者血液中CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞相关亚群含量高于健康志愿者。化疗可使乳腺癌患者外周血中CD44+CD24-/low细胞含量降低。血液中乳腺癌干细胞相关亚群含量与转移性乳腺癌患者肿瘤负荷具有一定相关性,可能会成为一项非常有价值的临床治疗效果判断指标。