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目的: 通过建立野生型婴幼小鼠、半乳糖凝集素-3(galectin-3,gla-3)基因敲除(gla-3-/-)婴幼小鼠细菌性脓毒症模型,检测两组小鼠外周血循环细菌清除率、腹腔巨噬细胞炎症因子 IL-8、TNF-α、IL-10 的表达水平,比较两组小鼠巨噬细胞的吞噬能力、吞噬体成熟化差异性,探讨 gla-3 在脓毒血症中的作用。同时检测脓毒血症新生儿 gal-3的表达水平,为新生儿脓毒症免疫干预提供新的思路。 方法: 1.选用2周龄野生型婴幼小鼠(20只)及gal-3基因敲除小鼠(20只),雌雄不限,采用腹腔注射法分别注射致死剂量革兰氏阴性鼠伤寒沙门氏菌(2.5x106 CFU/小鼠)建立细菌性脓毒症模型; 2.采用 ELISA 方法检测小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子 IL-8、TNF-α、IL-10 的表达水平; 3.通过外周血在胰蛋白酶大豆琼脂板培养形成的菌落单位(CFU)比较细菌清除率的差异;通过分离的巨噬细胞与鼠伤寒沙门菌共同孵育,比较胞内杀菌率; 4.采用 PH 敏感及不敏感荧光探针标记细菌,与巨噬细胞共同孵育,流式细胞仪检测平均荧光强度(反应吞噬体酸化);采用溶酶体示踪红荧光探针标记腹腔巨噬细胞,再将标记的巨噬细胞与FITC标记的细菌共同孵育,显微镜下拍照观察荧光反应(反应吞噬体/溶酶体融合); 5.ELISA方法检测健康及脓毒血症早产儿、足月儿gal-3、IL-8、TNF-α的表达水平。 结果: 1. 与野生型婴幼小鼠相比,gal-3-/-小鼠巨噬细胞 IL-8、TNF-α 的水平无显著差异(P>0.05),但IL-10的表达水平较低,且具有统计学意义(P<0.05)。 2.相比野生型婴幼小鼠,gal-3-/-小鼠的细菌清除率及胞内杀菌力明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。 3.与野生型婴幼小鼠相比较,gla-3-/-小鼠巨噬细胞吞噬体酸化明显不足,差异具有统计学意义(P<0.05),且吞噬体/溶酶体融合明显缺陷。 4.健康足月儿与健康早产儿相比,TNF-α 和 gal-3 的表达水平无明显差异,但IL-8 的水平明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05),脓毒症足月儿与健康足月儿以及脓毒症早产儿和健康早产儿相比,其gal-3、IL-8、TNF-α的表达水平明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.Gal-3-/-小鼠较野生型婴幼小鼠相比,对细菌性脓毒症更为易感。 2.Gal-3参与巨噬细胞介导的细菌吞噬及吞噬体成熟化。 3.Gal-3参与新生儿脓毒血症炎症反应。