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目的探索长链非编码RNA(1ncRNA)91H对食管鳞癌(ESCC)组织中胰岛素样生长因子2(IGF2)异常表达的调控机制,评价其在ESCC发生、发展中的作用。方法1、收集232例ESCC患者肿瘤组织和癌旁组织标本,购买培养食管鳞癌细胞系TE-1和Eca-109,人正常胃上皮细胞株GES-1。2、构建及鉴定91H干扰载体,利用Lip2000脂质体瞬时转染ESCC细胞株,G418筛选稳定转染细胞株。3、采用二甲基亚砜(DMSO)试剂将去甲基化试剂5-aza-CdR浓度调节至2.5,5,10mo1/L后,分别作用于ESCC细胞株,亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)筛选去甲基化细胞株。4、采用实时荧光定量RCR,ABI7500定量分析肿瘤细胞株与正常细胞株之间91HRNA表达差异。5、采用实时荧光定量RCRz,ABI7500定量分析转染前后ESCC细胞株内91H以及IGF2mRNA表达差异；同时采用免疫荧光(IF)分析比较转染前后ESCC细胞株内IGF2蛋白的表达差异。6、分离提取临床收集的肿瘤组织内DNA,亚硫酸氢测序法(BSP)分析比较ESCC患者体内H19差异甲基化区(DMD)甲基化程度与临床病理指征的相关性。7、分离提取临床收集的肿瘤组织以及癌旁组织内RNA,逆转录后,采用实时荧光定量RCR,ABI7500定量分析ESCC患者体内91H与IGF2mRNA表达量与临床病理指征的相关性。结果1、荧光定量PCR检测ESCC肿瘤细胞株与正常人粘膜上皮细胞株发现,91H RNA在肿瘤细胞株TE-1表达量为0.75±0.14,在Eca-109的表达量为0.46±0.12,均显著高于人GES-1细胞株0.29±0.11(p<0.05)。2、91H RNA干扰后,荧光定量PCR检测TE-1IGF2mRNA表达水平为4.91±1.68,明显高于阴性对照组1.38±0.61(p<0.05),Eca-109细胞株干扰后IGF2mRNA表达水平为3.62±1.44,同样明显高于阴性对照组1.75±1.00(p<0.05)；随后的IF检测发现,TE-11GF2蛋白表达量为7.60±0.66×104,显著高于阴性对照组2.01±0.43×104,Eca-109IGF2蛋白表达量为8.64±1.74×104,同样显著高于阴性对照组3.71±0.68×104。3、去甲基化试剂作用于各细胞株后,荧光定量PCR检测发现,细胞甲基化程度越低,91H表达水平越高(p<0.05)。4、BSP法分析比较ESCC患者肿瘤组织H19DMD甲基化程度后发现,患者肿瘤组织H19DMD区域甲基化程度与淋巴结受累情况、肿瘤浸润深度、肿瘤分级以及TNM分期无关(p<0.05)5、实时荧光定量RCR,ABI7500定量分析ESCC患者体内91H与IGF2mRNA发现,临床肿瘤患者肿瘤浸润程度越深、肿瘤等级和TNM分期越高,91H的表达量越低而IGF2表达量越高(P<0.05)。结论1、lncRNA91H的表达与H19DMD区甲基化程度密切相关。2、lncRNA91H对IGF2表达起抑制作用。3、提示lncRNA91H可作为一个新的临床肿瘤标志物用于ESCC的早期诊断。