抗病毒药物中核苷(酸)类似物药物疗效显著,其机制之一为通过底物竞争抑制影响DNA聚合酶催化的单核苷酸聚合能力,从而阻止病毒DNA的复制,控制感染者体内的病毒载量。拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定和替诺福韦等核苷(酸)类似物药物已被批准用于慢性乙型肝炎(Chronic Viral Hepatitis B,CHB)的治疗,其中前4种已在我国上市,替诺福韦也将在我国开展临床试验。核苷(酸)类似物在抑制外源病毒DNA聚合酶的同时,对人体自身DNA复制也会产生影响。由于慢性乙型肝炎病毒感染的治疗周期长,药物对人体的毒副作用会不断累积。目前研究发现,线粒体DNA聚合酶γ是异核苷类药物直接影响的对象之一,其结果是损伤mt DNA,进而导致线粒体疾病的发生。在异核苷类药物研究中,进行药物毒性评价,筛选和研发出低毒性和高抗病毒活性的药物具有非常重要的意义。本研究采用RT-PCR技术从人源细胞系(Hela Cell)获得了线粒体DNA聚合酶γ的2个c DNA片段,利用p MD18-T载体在大肠杆菌JM109中分别克隆并鉴定了人线粒体DNA聚合酶γ基因的2个片段,同时进行了系统进化分析。采用特异PCR将截短突变体基因连接并克隆至p ET28-p138载体,构建表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3),在大肠杆菌中进行了重组polγ聚合酶的诱导表达及包涵体重组蛋白复性,获得了有活性的酶蛋白。系统进化分析表明,哺乳动物线粒体DNA聚合酶基因的变异很大,物种间差异较大,进行人线粒体DNA聚合酶研究需克隆本物种基因。本研究初步建立了线粒体聚合酶γ体外原核表达体系,为大量获得polγ聚合酶提供了理论和技术基础,也为特殊功能DNA聚合酶体外表达研究提供了新思路和新方法。