线粒体聚合酶γ的原核表达及纯化

来源 :长春师范大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:wxbft
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
抗病毒药物中核苷(酸)类似物药物疗效显著,其机制之一为通过底物竞争抑制影响DNA聚合酶催化的单核苷酸聚合能力,从而阻止病毒DNA的复制,控制感染者体内的病毒载量。拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定和替诺福韦等核苷(酸)类似物药物已被批准用于慢性乙型肝炎(Chronic Viral Hepatitis B,CHB)的治疗,其中前4种已在我国上市,替诺福韦也将在我国开展临床试验。核苷(酸)类似物在抑制外源病毒DNA聚合酶的同时,对人体自身DNA复制也会产生影响。由于慢性乙型肝炎病毒感染的治疗周期长,药物对人体的毒副作用会不断累积。目前研究发现,线粒体DNA聚合酶γ是异核苷类药物直接影响的对象之一,其结果是损伤mt DNA,进而导致线粒体疾病的发生。在异核苷类药物研究中,进行药物毒性评价,筛选和研发出低毒性和高抗病毒活性的药物具有非常重要的意义。本研究采用RT-PCR技术从人源细胞系(Hela Cell)获得了线粒体DNA聚合酶γ的2个c DNA片段,利用p MD18-T载体在大肠杆菌JM109中分别克隆并鉴定了人线粒体DNA聚合酶γ基因的2个片段,同时进行了系统进化分析。采用特异PCR将截短突变体基因连接并克隆至p ET28-p138载体,构建表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3),在大肠杆菌中进行了重组polγ聚合酶的诱导表达及包涵体重组蛋白复性,获得了有活性的酶蛋白。系统进化分析表明,哺乳动物线粒体DNA聚合酶基因的变异很大,物种间差异较大,进行人线粒体DNA聚合酶研究需克隆本物种基因。本研究初步建立了线粒体聚合酶γ体外原核表达体系,为大量获得polγ聚合酶提供了理论和技术基础,也为特殊功能DNA聚合酶体外表达研究提供了新思路和新方法。
其他文献
以往对秦岭川金丝猴的研究主要集中在一雄多雌单元(OMU)内个体间的联系,而单元间关系的研究较少,多限于OMU间的等级和雌性迁移的研究,然而,秦岭川金丝猴社群由多个OMU组成,当
近年来,光信号处理与光子计算机将具有举足轻重的地位。光敏传感阵列是探测器前端最为核心的元件。其在航天、军事和生物等领域都有广泛的应用。本文研究GaAs/AlAs/AlGaAs/In
声波在传播过程中遇到障碍物时,会产生散射现象,即传播方向发生改变.散射现象与声波的频率、波长及障碍物有关,而障碍物分为可穿透障碍和不可穿透障碍.本文主要研究截面为光
随着消费的升级,商品的包装不再仅限于介绍商品信息和美感表达,并很大程度上反映了一个公司的文化,对维系消费者忠诚度起到了重要的作用。随着互联网企业的增加,电商企业对商品和企业的物理包装和品牌包装的需求日益增加,有效的运营管理也为电商从业者提出了挑战。作为电商包装从业者,作者希望通过将EMBA期间学习的知识应用到公司的运营和发展中,更好的指导公司未来的发展。结合EMBA学习过程中的市场营销,战略管理等
移动机器人是智能化生产线和智能化物流仓储领域的关键组成部分之一,在生产、服务等领域得到越来越多的应用。相比于一般的自主导航任务,移动机器人在工作点处的停靠对精度有
本文分别通过固体氘谱核磁共振技术和高分辨液体核磁共振技术研究了两种不同高分子的结构和分子运动:1、通过一系列静态2H NMR固体回波技术,研究了三种不同聚合方式的全氘代聚
本文在二维磁光阱中,利用“暗线”屏蔽中心原子与光的作用,来减少辐射效应以增大原子的密度。本文旨在获得较高的光学深度(OD),同时获得较高的实验占空比。本文通过“暗线”
自扫描隧道显微镜(Scanning Tunneling Microscopy,SIM)问世以来,它就不断地向人们拓展对表面原子级结构的理解。它实现了实空间直接的原子结构的成像,展现了原子尺度下物理
量子纠缠是量子力学中最奇妙的特性,在量子计算、量子通信、量子隐形传态、量子密集编码等量子信息中有着重要的应用。目前,纠缠原子与光场相互作用的量子特性已经被广泛研究
强光作用于离散的非线性波导时会发生耦合作用、离散衍射效应和介质非线性效应,当这三种效应相互平衡时就会形成一种在传输过程中不发生形变的自陷光束,又称离散光孤子。数学