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[目的]
肝癌是我国常见的恶性肿瘤,现阶段,肝癌的治疗仍然首选手术治疗。但肝癌恶性程度高,预后差,且肝癌早期缺乏典型临床症状,导致很多肝癌患者在就诊时候往往已经丧失手术治疗机会。手术治疗肝癌,肿瘤切除后余肝大小及肝硬化程度往往是大肝癌能否切除的关键。术后发生肝功能衰竭是最危险的并发症之一。原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OTL)是目前治疗终末期肝病和代谢性肝病最有效的方法,但目前异体肝移植存在供肝严重不足,手术及维持费用昂贵,手术风险大,以及移植由于免疫排斥的发生而导致供肝功能丧失等缺点,OTL在临床广泛开展仍有一定的困难。
干细胞移植技术的出现,带来新的希望。
骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cell,BMSC)具有多能分化的特点,在体外不同的诱导条件下可分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱、肌肉细胞、肝细胞、神经细胞等多种细胞。由于BMSC有取材方便、易于体外培养扩增、植入体内不易引起免疫排异反应、不存在伦理学争议等众多优点,而且近年的研究发现,MSCs对肝脏疾病治疗不仅在于为替代肝细胞移植、在早期即能修复肝脏损伤,而且还能够降低宿主抗移植物反应。MSCs作为种子细胞治疗终末期肝病的应用将越来越大。
为了进一步改善肝大部分切除术后肝功能衰竭的情况,降低围手术期死亡率,本研究将对骨髓间充质细胞(MSC)肝内移植对大鼠肝80%切除肝衰竭模型术后肝功能、生存率的影响作初步探讨。
[方法]
1.肝大部分切除边缘肝衰竭大鼠模型的建立:手术切除大鼠80%肝组织(切除肝左叶、右叶、方叶下段,保留方叶上段、尾叶),观察大鼠的存活,肝功能生化指标;建立大鼠极限肝切除模型。(n=15)
2.移植MSC制备:梯度离心+贴壁法分离大鼠原代MSC,传代纯化,流式细胞学鉴定,用脂质体Lipofectamine2000将PE-GFP C3转染MSC作为体内示踪工具。
3.MSC肝内移植对肝大部分切除边缘肝衰竭模型术后生存率、肝功能的影响: A组,即实验组(n=18):80%肝叶切除+门脉注射0.5ml含1×106MSC的PBS,B组,即对照组(n=18):80%肝叶切除+门脉注射0.5mlPBS。观察术后大鼠的存活率、肝功能生化指标及受体大鼠肝组织内移植细胞情况。
[结果]
1.手术切除大鼠80%肝组织可以建立大鼠极限肝切除模型。7天后存活情况7/15,存活率为46.7%。
2.成功分离大鼠原代MSC,流式细胞学结果CD29+(99.3%)、CD44+(97.1%)CD34+(0.7%)、CD45+(1.4%)。GFP标记MSC成功。
3.MSC肝内移植对肝大部分切除模型术后生存率、肝功能的影响:术后7天内的存活率分别为A组72.2%(13/18)、B组44.4%(8/18)。A组的存活率明显高于B组(72.2%VS44.4%,P<0.05;A组大鼠术后肝功能恢复情况明显优于B组(p<0.05);A组肝组织中可观察到移植的细胞。两组间第3天、第7天AST、ALT、TBIL、DBIL、ALB均有明显差别。P均小于0.05。A组肝组织中可观察到移植的细胞。
[结论]
经门静脉的MSC移植可促进80%肝切除边缘肝衰竭大鼠肝功能恢复和提高生存率,可在受体肝组织中观察到存活移植的MSC。