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第一章乙酰肝素酶在膀胱移行细胞癌组织中的表达及临床意义
[目的]:检测膀胱移行细胞癌组织中乙酰肝素酶(HPA)及VEGF mRNA的表达,初步探讨HPA在膀胱移行细胞癌中的临床意义。
[方法]:应用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测膀胱移行细胞癌组织中HPA蛋白和mRNA表达,分析其表达与肿瘤部分临床、病理学特征的关系。同时,应用RT-PCR法检测膀胱移行细胞癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达并分析其与HPA mRNA表达的相关性。
[结果]:免疫组织化学染色发现:12例正常膀胱组织未发现HPA阳性表达,62例膀胱移行细胞癌组织中有30例HPA表达阳性,阳性表达率占48.38%,其表达与肿瘤的临床分期、淋巴转移及复发明显相关。12例正常膀胱组织未发现HPAmRNA阳性表达,膀胱移行细胞癌组织中HPA mRNA阳性表达率为58.06%(36/62)。其表达与肿瘤的病理分级、临床分期、淋巴结转移及复发明显相关。VEGF mRNA的阳性表达率也与膀胱肿瘤的分期及复发显著相关,而且,HPA与VEGF二者mRNA的表达具有明显相关性(r=0.501,P<0.001)。
[结论]HPA在膀胱移行上皮细胞癌的侵袭和血管生成过程中具有重要的作用,HPA可能可以用于临床监控膀胱肿瘤的进展。
第二章乙酰肝素酶小干扰RNA对人膀胱癌BIU-87细胞株增殖粘附侵袭能力影响的初步研究
[目的]:乙酰肝素酶(HPA)与肿瘤生长、侵袭和转移密切相关,并可能成为肿瘤治疗的重要靶点。本文旨在探讨阳离子脂质体介导的乙酰肝素酶小干扰RNA对膀胱癌细胞增殖及侵袭能力的影响,力求在膀胱癌治疗研究中有所突破。
[方法]:体外化学合成一段肝素酶特异性小干扰RNA(siRNA)序列,并设计与其碱基组成相同,但碱基顺序随机排列的一对错义序列siRNASCR作为对照。以阳离子脂质体介导将不同浓度的siRNA及siRNASCR转染至膀胱癌细胞系BIU-87细胞中,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学方法检测转染前后BIU-87细胞中HPA mRNA及蛋白表达;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测细胞的增殖及粘附能力;采用transwell小室侵袭试验测定肿瘤细胞的体外侵袋力;同时,应用逆转录-聚合酶链反应(RI-PCR)检测小干扰RNA沉默HPA基因后BIU-87细胞中MMP-9和VEGFmRNA表达。
[结果]:转染HPA siRNA可以显著降低BIU-87细胞中的HPAmRNA及蛋白表达,并可降低BIU-87细胞中的MMP-9和VEGFmRNA表达。HPA siRNA处理细胞48小时,于50nmol/L的HPAsiRNA浓度条件下即可显著抑制BIU-87细胞的增殖,而且这种抑制作用随HPA siRNA浓度的增加、其时间的延长而增强。与对照组相比,各有效浓度的HPA siRNA可显著抑制BIU-87细胞的体外粘附和侵袭能力(P<0.05)。RNA干扰沉默BIU-87细胞HPA基因后,MMP-9和VEGF mRNA表达水平明显下降。
[结论]:以siRNA阻遏乙酰肝素酶在膀胱癌BIU-87细胞株中表达可以成功地抑制BIU-87细胞增殖、粘附及侵袭能力,HPA基因沉默后导致MMP-9和VEGF表达下降是其可能机制之一。通过应用RNA干扰技术等方法抑制乙酰肝素酶活性可能可以应用于临床治疗膀胱癌。