半夏及干姜人参半夏复方对小鼠原肠胚相关蛋白表达的影响

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做好胎儿保健是健康生命的基础,妊娠期用药是胎儿保健中的重要内容,随着中医药的发展,妊娠期中药的应用越来越广泛,中药妊娠毒性也受到越来越多的关注。半夏因其燥湿化痰、降逆止呕的功效良好,在妊娠恶阻、妊娠咳嗽、妊娠眩晕等疾病的治疗中发挥重要作用,但古代文献记载中它在妊娠期应用的安全性还存有争议,现代实验研究表明生半夏有妊娠毒性。干姜人参半夏复方为治疗妊娠恶阻的名方,文献中未见关于其妊娠毒性的记载,且其疗效在临床得到验证[1]。半夏妊娠毒性的作用机制是什么?干姜人参半夏复方为何能解半夏毒性?本实验采用免疫印迹(Western Blot)方法检测半夏及干姜人参半夏复方对于小鼠原肠胚相关蛋白表达的影响,以探索半夏妊娠毒性与纤维蛋白原β(FGB)、α-微管蛋白(α-Tubulin)、钙调蛋白(CaM)表达是否有关,研究干姜人参半夏复方解毒与上述蛋白表达的关系。  目的:  将半夏及干姜人参半夏复方分别以粉剂及煎剂形式作用于小鼠妊娠早期,取妊娠小鼠胚胎组织,检测胚胎中FGB、α-Tubulin、CaM表达水平,以探究半夏妊娠毒性与FGB、α-Tubulin、CaM表达是否有关,研究干姜人参半夏复方解毒与上述蛋白表达的关系。  方法:  妊娠小鼠分为正常对照组、生半夏粉组、生半夏汤组、干姜人参半夏粉组、干姜人参半夏汤组。在妊娠第6天开始灌胃,连续灌胃3天。正常对照组每只小鼠灌胃蒸馏水0.4ml/天,生半夏粉组每只小鼠灌胃0.17g/ml生半夏混悬液0.4ml/天,生半夏汤组每只小鼠灌胃0.17g/ml生半夏汤0.4ml/天,干姜人参半夏粉组每只小鼠灌胃0.21g/ml干姜人参半夏混悬液0.8ml/天(分两次,每次0.4ml),干姜人参半夏汤组每只小鼠灌胃0.43g/ml干姜人参半夏汤0.4ml/天。在妊娠第9天脱颈椎处死孕鼠,剥离完整胚胎组织并冻存,提取胚胎组织全蛋白并用Western Blot方法检测胚胎组织中FGB、α-Tubulin、CaM表达水平。  结果:  1.纤维蛋白原(FGB)表达:生半夏粉组、生半夏汤组、干姜人参半夏粉组比正常对照组低,且差异有统计学意义(P<0.01),干姜人参半夏汤组与正常对照组相比差异无统计学意义;组间比较生半夏粉组与生半夏汤组差异无统计学意义,干姜人参半夏粉组比干姜人参半夏汤组表达水平低且差异有统计学意义(P<0.01),生半夏粉组与干姜人参半夏粉组差异无统计学意义,生半夏汤组比干姜人参半夏汤组表达水平低且差异有统计学意义(P<0.01)。  2.α-微管蛋白(α-Tubulin)表达:各用药组与正常对照组相比差异均无统计学意义;组间比较生半夏粉组与生半夏汤组差异无统计学意义,干姜人参半夏粉组比干姜人参半夏汤组表达水平低且差异有统计学意义(P<0.05),生半夏粉组与干姜人参半夏粉组差异无统计学意义,生半夏汤组比干姜人参半夏汤组表达水平低且差异有统计学意义(P<0.05)。  3.钙调蛋白(CaM)表达:生半夏粉组、生半夏汤组比正常对照组表达水平低,且有统计学差异(P<0.01),干姜人参半夏粉组、干姜人参半夏汤组比正常对照组表达水平高,且有统计学差异(P<0.01);组间比较生半夏粉组与生半夏汤组差异无统计学意义,干姜人参半夏粉组与干姜人参半夏汤组差异无统计学意义,生半夏粉组比干姜人参半夏粉组表达水平低且差异有统计学意义(P<0.01),生半夏汤组比干姜人参半夏汤组表达水平低且差异有统计学意义(P<0.01)。  结论:  1.生半夏粉、生半夏汤、干姜人参半夏粉对小鼠原肠胚纤维蛋白原表达有抑制作用;干姜人参半夏复方对小鼠原肠胚纤维蛋白原表达的影响与配伍及煎煮都相关。  2.生半夏粉、生半夏汤、干姜人参半夏粉、干姜人参半夏汤对小鼠原肠胚α-微管蛋白表达无明显影响。  3.生半夏粉、生半夏汤对小鼠原肠胚钙调蛋白表达有抑制作用;干姜人参半夏粉、干姜人参半夏汤对小鼠原肠胚钙调蛋白表达有增强作用;干姜人参半夏复方对小鼠原肠胚钙调蛋白表达的影响与配伍相关。  4.半夏妊娠毒性作用与抑制纤维蛋白原和钙调蛋白表达,从而导致胚胎出血、淤血,细胞分裂、分化、代谢异常有关;干姜人参半夏复方通过配伍及煎煮可解除半夏对纤维蛋白原表达的抑制,通过配伍可解除半夏对钙调蛋白表达的抑制,从而达到解半夏妊娠毒性的作用。
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