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第一部分 生长激素改善不孕女性IVF助孕结局的系统评价与Meta分析目的生长激素(GH)被应用于临床上改善IVF助孕结局的效果被广泛关注,提高不孕女性尤其是“卵巢低反应”患者IVF的助孕结局尤为重要。采用系统评价meta分析的方法,评价IVF周期联合使用GH对助孕结局的影响。方法计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM)、万方数据库、中国学术期刊全文数据库/中国知网(CNKI)、维普数据库(VIP)、PubMed、EMbase、Web of Science和Cochrane Library 数据库。检索词包括“生长激素”、“GH”、“IVF”和“in vitro fertilization”等,纳入所有符合检索策略且提供了干预和对照组受试对象助孕结局的随机对照试验,主要结局指标包括临床妊娠率和活产率,次要结局指标包括获卵数、MII期卵母细胞数、受精率、种植率、不良妊娠结局发生率(包括流产率)。采用固定或随机效应模型进行分析。由两名评价员分别独立筛选文献、提取资料并进行临床试验偏倚风险评估。利用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果最终纳入9个RCT研究,共计586名不孕女性。Meta分析结果显示IVF助孕周期联合使用GH,可以增加卵巢低反应患者的获卵数[MD=1.50,95%CI(1.19-1.81)]、MII期卵母细胞数[MD=2.10,95%CI(1.82-2.38)],提高其临床妊娠率[OR=1.53,95%CI(1.04-2.26)]和活产率[OR=1.73,95%CI(1.04-2.88)](P<0.05)。但是,受精率[OR=1.18,95%CI(0.93-1.50)]、种植率[OR=1.19,95%CI(0.99-1.41)]、流产率[OR=1.47,95%CI(0.64-3.38)]和不良事件发生情况在GH干预组和对照组之间没有统计学差异(P>0.05)。GH的干预剂量推荐为中低剂量(4IU-12IU),干预时间为自上一月经周期第21天开始直至HCG日或者从超促排卵第1天开始直至HCG日。结论GH可以改善POR、高龄或既往IVF失败患者IVF周期的助孕结局,GRADE证据质量评价为强推荐。但是由于纳入研究的多数文献样本量小、受试对象纳入标准不一,因此无法确定哪一类POR人群获益最大,未来需要更大人群的多中心研究来验证。第二部分生长激素改善小鼠超促排卵周期卵母细胞质量的研究及机制目的由于卵巢储备的卵泡数量减少和卵母细胞质量的下降,女性38岁以后的妊娠率明显下降。目前仍然缺乏有效的干预措施及潜在机制研究。本研究构建高龄和低龄小鼠生长激素(GH)干预模型,探讨超促排卵前补充生长激素(GH)对小鼠体内卵母细胞成熟度和线粒体功能的影响。方法将高龄(40周龄)和低龄(12周龄)的雌性C57BL/6J小鼠分别随机分为5组(共10组):空白对照组、阴性对照组、rhGH低剂量(0.4mg/kg/d)、中剂量(0.8mg/kg/d)和高剂量干预组(1.6mg/kg/d),干预8周后用PMSG进行超促排卵,HCG注射后8小时取外周血和卵巢组织、14-16小时取成熟卵母细胞进行检测。比较不同亚组外周血AMH水平,HE染色观察卵巢组织中不同时期卵泡的数量,观察总的获卵数及MII期卵母细胞数,荧光定量PCR方法检测卵巢组织生长分化因子GDF9、谷胱甘肽过氧化物酶家族GPx4基因mRNA水平的表达,免疫荧光染色分析卵母细胞线粒体的分布、线粒体膜电位、卵母细胞总的ROS水平和线粒体特异性氧化损伤情况,检测单个卵母细胞内ATP水平、mtDNA拷贝数和卵丘扩展相关基因PTX3、TNFAIP6基因mRNA水平的表达。结果高龄小鼠rhGH干预组卵巢体积明显增大,中、高剂量组卵巢中有腔卵泡的数量显著增加(P<0.05),而腔前卵泡的数量没有明显变化。低龄小鼠外周血平均AMH水平是高龄小鼠的3倍,rhGH干预后高龄小鼠AMH的水平、卵巢组织GDF-9、GPx4基因mRNA表达的水平与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。高龄小鼠超促排卵总的获卵数、MII期卵母细胞数、MII卵率和单个卵母细胞内ATP水平均显著低于低龄小鼠(P<0.05),经过rhGH干预后,高龄小鼠中、高剂量rhGH干预组总的获卵数、MII期卵母细胞数、MII卵率和单个卵母细胞的ATP水平显著高于对照组(P<0.05),其中MII卵率和ATP水平接近低龄小鼠平均水平(P>0.05)。高龄小鼠rhGH干预组线粒体膜电位(ΔΨm)、线粒体呈均匀分布的比例显著增加(P<0.05)。低龄小鼠中、高剂量rhGH干预组ΔΨm显著高于空白对照组(P<0.05)。高龄和低龄小鼠各亚组单个卵母细胞线粒体mtDNA拷贝数、卵母细胞总的ROS水平均无显著性差异(P>0.05)。高龄小鼠各亚组卵母细胞线粒体内超氧化物水平显著高于低龄小鼠空白对照组(P<0.05),经rhGH干预后,中剂量rhGH干预组线粒体内超氧化物水平显著降低(P<0.05)且TNFAIP6基因mRNA表达的水平显著增加(P<0.05)。结论中剂量的rhGH预处理可以显著提高高龄小鼠超促排卵周期的获卵数、MII卵母细胞率、单个卵母细胞内ATP的水平、线粒体膜电位,增加均匀颗粒样分布的线粒体比例,降低线粒体内特异性氧化损伤。但是,rhGH预处理并不能改善高龄小鼠的卵巢储备功能、增加线粒体mtDNA的拷贝数。而对于低龄小鼠,除了线粒体膜电位,大多数指标在rhGH干预后无明显变化。本研究首次发现中剂量的rhGH预处理8周可以通过提高线粒体功能来改善高龄小鼠的卵母细胞质量。但是rhGH的最佳剂量、干预的节点及持续时间、临床用药的安全性仍然需要大样本的临床研究来证实。