抑癌基因NPRL2与肾癌临床病理特征及细胞生物学特性的关系研究

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目的:(1)检测抑癌基因NPRL2在人肾透明细胞癌组织中的表达情况并分析其与临床病理特征的关系;(2)研究NPRL2蛋白的表达对人原代培养的肾透明细胞癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法:(1)用免疫组织化学方法检测抑癌基因NPRL2在人肾透明细胞癌及其癌旁组织标本的表达情况;(2)采用HG_TransGene将重组质粒pEGFP-N1-NPRL2和pEGFP-N1转染原代培养的人肾癌细胞;(3)应用激光扫描共聚焦显微镜观察质粒的转染情况;(4)运用qRT-PCR和Western blot分别检测NPRL2 mRNA和融合蛋白在各组的表达情况;(5)MTT法检测原代培养的人肾透明细胞癌细胞的增殖情况;(6)流式细胞术分析转染后原代培养的人肾透明细胞癌细胞周期和凋亡情况。结果:(1)免疫组织化学显示在78例肾癌和癌旁组织标本中,肾癌组织中NPRL2的表达明显低于癌旁组织(P<0.001);临床病理分析显示NPRL2的表达与肿瘤组织学分型(P=0.044), TNM分期(P=0.025)和是否有淋巴结转移(P=0.028)密切相关,而与患者年龄(P=0.892)及性别(P=0.873)无明显关系;(2)激光扫描共聚焦显微镜结果显示质粒pEGFP-N1-NPRL2和pEGFP-N1成功转染原代培养的人肾癌细胞;(3)实时荧光定量PCR结果显示重组质粒组NPRL2 mRNA的表达明显高于空质粒组和空白对照组(P<0.001);(4)免疫印迹法结果显示重组质粒组有NPRL2融合蛋白的表达,而空质粒组和空白对照组未见其表达;(5)MTT结果显示NPRL2的表达能明显抑制原代培养的人肾透明细胞癌细胞的增殖;(6)流式细胞术结果显示NPRL2的表达能促进原代培养的人肾透明细胞癌细胞的凋亡并使细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:抑癌基因NPRL2在肾癌中呈低表达且与临床病理特征密切相关,并能抑制肿瘤细胞的增殖和促进细胞凋亡。
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