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目的:研究Pim-2基因的异位过表达是否引起张氏肝细胞恶性转变,探讨Pim-2蛋白与肝细胞癌的关系。方法:实验设三组:转染Pim-2基因的张氏肝细胞组(转染组)、转染空质粒的张氏肝细胞组(空质粒组)和张氏肝细胞组(未转染组),细胞在含10%FBS的RPMI 1640培养基里连续培养20代后进行实验。倒置显微镜下观察培养细胞的形态;MTT法检测细胞增殖和绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡;8μmMillicell小室检测细胞体外迁移能力;RT-PCR检测三组细胞Pim-2 mRNA表达;细胞免疫组化检测三组细胞Pim-2蛋白表达;细胞接种裸鼠观察细胞成瘤性,光镜和透射电镜(TEM)观察肿瘤细胞形态。结果: (1)倒置显微镜下转染组张氏肝细胞呈长梭形,有较多细小突起,细胞大小不一,空质粒组张氏肝细胞与未转染组张氏肝细胞形态相近,呈多角形或椭圆形,大小一致;(2)细胞接种24h内,转染组、空质粒组和未转染组细胞OD570平均值分别是0.453±0.042、0.418±0.044和0.423±0.034,三组张氏肝细胞增殖无明显差异(P>0.05);48h、72h、96h、120h转染组平均OD570值是0.640±0.050、0.939±0.110、1.063±0.115、1.171±0.135 ,与未转染组(0.459±0.044、0.694±0.077、0.869±0.048、0.966±0.103)相比有显著差异(P<0.05),而空质粒组(0.484±0.064、0.716±0.095、0.855±0.068、0.956±0.109)与未转染组相比增殖无差异(P>0.05)。三组张氏肝细胞均呈“S”形生长曲线,接种后2-3天细胞生长最快。(3)转染组、空质粒组、未转染组张氏肝细胞平均凋亡率(%)分别为: 2.33±0.86%、5.45±0.36%、5.71±1.45%,转染组比未转染组细胞凋亡率显著降低(P<0.05),空质粒组与未转染组相比,细胞凋亡率无差异(P>0.05);(4)转染组张氏肝细胞通过Millicell小室微孔膜迁移的平均细胞数(95.1±4.75个/高倍视野)比未转染组(75.0±6.57个/高倍视野)多,有统计学差异(P<0.05),空质粒组张氏肝细胞迁移细胞数(72.2±5.67个/高倍视野)与未转染组相比无差异(P>0.05);(5)转染组张氏肝细胞Pim-2 mRNA表达明显强于空质粒组与未转染组;(6)转染组张氏肝细胞的胞浆、胞核均有Pim-2蛋白表达,另两组未表达;(7)转染组张氏肝细胞接种裸鼠第9天肿瘤长出,第21天该组裸鼠均可见肿瘤生长,肿瘤平均体积0.6cm×0.5cm×0.3cm;肿瘤组织切片HE染色光镜下可见组织结构紊乱,细胞呈团块状,大片组织坏死,细胞异形性明显,核大,核浆比增大,核仁明显,核分裂相多,可见病理性核分裂相;TEM下细胞形态不规则,大小不一,胞质内可见较多滑面内质网,线粒体少、增大,其他细胞器少见,胞核大,细胞主要为核占据,核不规则,有深凹陷,核内常染色质多,核仁大。接种空质粒组张氏肝细胞与未转染组张氏肝细胞的裸鼠未见肿瘤生长。结论: (1)Pim-2基因转染张氏肝细胞后可稳定表达,在细胞浆和细胞核中均出现Pim-2蛋白表达;(2)转染Pim-2基因后张氏肝细胞出现形态、生长、增殖、凋亡及迁移能力的改变,表现出恶性转变的趋势;(3)转染Pim-2基因的张氏肝细胞在裸鼠上形成肿瘤,肿瘤组织结构符合人肝癌组织的病理形态特征,表明Pim-2蛋白可以导致张氏肝细胞发生恶性转变。