艾滋病(AIDS)自1981年被发现以来,便在世界范围内迅速蔓延,越来越多的人被人类免疫缺陷病毒(HIV)感染,人类健康和社会都受到了极大的危害。对HIV的有效控制、预防及治疗是人类迫切想要解决的问题。HIV的包膜蛋白含有HIV最重要的抗原成分,同时也是其构成成分中最容易变异的组分,对于HIV诊断试剂、中和抗体和疫苗的研究都至关重要,长期以来一直是HIV的研究热点。然而HIV包膜蛋白的糖基化程度很高,且很难分泌表达,这些都不利于蛋白的获取,对其结构和功能的研究工作造成了阻碍。　　 本研究通过对HIV包膜糖蛋白gp160进行基因改造,获得了能够分泌表达且带有His-tag的稳定的可溶性HIV包膜糖蛋白gp140。该蛋白去掉了gp41的跨膜结构域和胞内结构域,对gp120末端的蛋白酶水解位点进行定点突变,用哺乳动物细胞表达中常用的tPA信号肽代替gp160自身的信号肽,并在目的蛋白末端加入了纯化标签His-tag,我们将其命名为gp140b2-his。　　 由于HIV包膜蛋白gp140对糖基化修饰水平要求很高,一般的外源蛋白表达系统难以胜任。本研究选用哺乳动物细胞HEK293-6E成功地分泌表达出糖基化完全的gp140b2-his,并对其瞬时表达条件进行优化,采用真核表达载体pTT5,换用廉价的无血清培养基,以及使用改良的转染方法,使得gp140b2-his产量提高且杂蛋白含量少。　　 经过粗纯、镍离子金属螯合亲和层析以及阴离子作用层析纯化,获得了纯度高达85％以上且反应性较好的gp140蛋白,为后续对HIV包膜蛋白分子结构与功能的研究提供了一定的信息,且有利于HIV诊断试剂的提高及中和抗体和疫苗的研究。