本项目由军队九五攻关课题重点实验室基金资助。主要内容分三个部分：(1)定量研究爆震致聋的耳蜗病理；(2)通过应用免疫组化和原位杂交的方法，研究耳蜗螺旋神经节细胞内睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor CNTF)及其mRNA的表达。(3)研究外源性睫状神经营养因子对爆震致聋的防治作用。 主要实验结果如下： 1．为更准确地研究爆震致聋对耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞及穿越耳蜗Corti隧道的神经纤维的病理变化，为进一步的应用治疗研究提供可靠的量化手段和标准，通过复制爆震声致聋豚鼠模型，进行琥珀酸脱氢酶(SDH)染色、耳蜗铺片计算机辅助定量研究毛细胞数；耳蜗乙酰胆碱脂酶染色、铺片、计算机辅助定量研究穿越耳蜗Corti隧道中传出神经纤维；耳蜗病理切片螺旋神经节细胞计数及其超微结构变化。结果是正常对照组、噪声暴露后21d的实验组耳蜗毛细胞总数分别为9045±102.6、7351±196.5；而螺旋神经节细胞计数在二回下组间相差明显，分别为51±4.72、27±6.94，以上均数各组间相差显著。爆震后21天穿越耳蜗Corti隧道中传出神经纤维数明显减少，损伤主要发生在耳蜗第一回和第二回，爆震后21天第一回和第二回每0.24mm长度穿越耳蜗Corti隧道中传出神经纤维数分别为11.4±3.2、10.6±2.5根；而正常对照组为23.2±3.2、20.7±2.9根，两组各回间均有显著统计学差第二军医大学博士论文异。豚鼠螺旋神经节细胞透射电镜观察见爆震组震后3d出现线粒体明显肿胀，线粒体靖断裂;21d后线粒体数量明显减少，且有畸形。而同期的正常对照组未发牛卜述现象。结论:爆震后不仅ABR闽值升高，毛细胞数减少，而且耳蜗螺旋神经节细胞数也明显祠吐卜，耳蜗C而隧道中传出神经纤维变性坏死，残留耳蜗螺旋神经节细胞线粒体超微结构有明显病变。 2.近年的研究表明，睫状神经营养因子(cili卿朋训力叩址c叙加rCNI下)对感觉神经元、运动神经元等多种神经元均有促进存活及防止损伤的作用，同时在神经系统发育、分化及损伤修复中也发挥重要作用。能促进听泡神经节神经元的轴突生长，参与听觉系统的发育。为探讨在耳蜗螺旋神经节细胞内是否有CNTF和mRNA的表达及其爆震后的病理变化，用鼠抗CNTr单克隆抗体和生物素标记的CNI下特异性的m丑NA探针，通过免疫组化和原位杂交方法分别检测了5例正常豚鼠和5例经爆震后豚鼠的耳蜗中轴切片上蜗轴螺旋神经节细胞内CN丁r及其mRNA的表达。结果是免疫组化和原位杂交实验均显示耳蜗中轴切片上可见正常豚鼠蜗轴螺旋神经节内有均匀分布的CNTr及其mRNA阳性反应细胞，而经噪声暴露后21天的豚鼠耳蜗中轴切片上CNT下及其mRNA阳性反应细胞明显减少，且染酬良不均匀。结论:在耳蜗螺旋神经节细胞内存在CNTF及其mRNA的表达，而爆震可能影响其阳性表达。3.为探索应用睫状神经营养因子(cifi娜netm丈rophic盘ctor CNTF)防治爆震声对豚鼠内耳损伤的可育创生，从而为噪声致聋的防治提供新的方法。第二军医大学博士论文在复制强脉冲噪声致聋豚鼠模型的理药出上，应用CNTr治疗3周，等量的生理盐水作对照，并进行耳蜗铺片计算机图象分析毛细胞计数、螺旋神经节细胞计数、耳蜗乙醚旦碳朋旨酶染色铺片和ABR闺值测定。结果:正常对照组、噪声暴露后21天的生理盐水对照组和CNTr组耳蜗毛细胞急数分别为卯男士103.6、7351士l%.5、8522士203.1;而螺旋神经节细胞计数在耳蜗中轴切片二回下组间相差明显，分别为51士4.72、27士6.94、37士1 0.4，以上均数各组间相差显著。乙酞胆碳叨旨酶染色铺片结果示CN，作组较生理盐水对照组耳蜗乙酞胆碱酷酶活性损失轻、范围小。结论:CNTr在一定程度上能防止受损的螺旋神经节细胞及听毛细胞发生变性坏死并可育濒进其损伤修复。经检索，上述实验结果中有如下几点尚未见国内夕沸馗:1.将计算机图象分析技术应用到爆震后耳蜗病理研究，更准确地研究爆 震致聋对耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞及穿越耳蜗Co币氏隧道的神 经纤维的病理变化。2.通过应用免疫组化和原位杂交的方法，证实在耳蜗螺旋神经节细胞内 存在CNT下及其mRNA的表达。3.证实外源性CNTr在一定程变上能防止受损的螺耐申经节细胞及听毛 细胞发生变胜坏死，开辟爆震性聋防治研究的新途径。 第二军医大学溥士论文 研究本项目的作用意义:1本项目关于计算机辅助的耳蜗定量病理的研究，可以更准确地了解爆 震致聋对耳蜗的损伤，为进一步的应用治疗研究提供可靠的量化手段 和标准，将耳蜗病理研究水平提到一个新的高度。经过实际应用，取 得良好的效果，提高了耳蜗病理研究的质量。2将外源性神经生长因子引入到爆震致聋的防治领域，其本身是一种 有益的探索，了解CNTF在一定程度上能防止受损的螺旋神经节细胞 及听毛细胞发生变性坏死，为进一步研究通翅吵卜源性干预来促进耳蜗 损伤修复提供了有价值的研究涅药出。螺原