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目的：本研究我们将观察从白念珠菌培养上清液中分离到的一种新型毒力因子分泌型IL-12抑制因子（Secretary IL-12Inhibitory Factor，SIIF）对人类单核细胞增殖率的影响和诱导凋亡情况，检测其诱导凋亡活性。观察SIIF蛋白结合于人类单核细胞的部位。明确SIIF的蛋白序列和基因序列，筛选出可疑蛋白，有助于后期SIIF蛋白作用机制的研究及将来有可能采取特异性干扰SIIF蛋白活性的治疗方案来控制局部及系统性的白念珠菌感染。方法：白念珠菌菌株选自前期试验中收集念珠菌性阴道炎（vulvovaginal candidiasis, VVC）患者阴道分泌物经直接镜检、接种培养形态学鉴定及提取DNA检索基因组数据库均鉴定为白念珠菌的菌株。人类单核细胞选用人急性单核细胞白血病细胞系（The Human acutemonocytic leukemia cell line, THP-1）。将选定的白念珠菌接种于含有20mlRPMI1640培养液的离心管中，置于37度恒温振荡培养箱中振荡培养，经两次纯化后接种于含有500mlRPMI1640液体培养基烧瓶中，继续37度恒温振荡培养箱培养24小时，培养后收集培养上清液，分装入离心管中离心除去白念珠菌，离心后的上清液经除菌滤过器（0.22μm）再次除菌，将培养上清液加入Centricon-70蛋白浓缩器（截留分子量大于30KDa的蛋白分子）中离心浓缩得到SIIF蛋白，BCA法测定蛋白浓度后-80度保存备用。实验根据是否在培养的人单核细胞中加入SIIF蛋白分为实验组和对照组，实验组SIIF蛋白终浓度为400μg/ml。SIIF蛋白与THP-1细胞共同培养24小时后GENMED XTT法分别检测实验组和对照组450nm波长处吸光度值并根据吸光度值计算出实验组相对对照组细胞增殖率；AnnexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪(Flow cytometry，FCM）分别检测实验组和对照组THP-1细胞早期凋亡率；ConA-FITC/DAPI双染法荧光显微镜观察SIIF蛋白结合于细胞部位；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分离纯化SIIF蛋白，电泳后的SDS-PAGE条带经胰蛋白酶酶解后进行液相色谱-串联质谱法（liquid chromatography–tandem massspectrometric，LC-MS/MS）分析，然后采用Mascot软件检索NCBInr数据库获得与肽段匹配的相关蛋白及其基因序列，最后根据蛋白分子量大小、评分及相关功能综合评价筛选出可疑蛋白。测得的THP-1细胞增殖率及细胞早期凋亡率应用SPSS17.0软件包进行统计分析。结果：1.GENMEDXTT法检测显示SIIF蛋白作用于THP-1细胞24小时后，450nm处吸光度值明显低于对照组，实验组相对对照组细胞增殖率也明显低于对照组，与对照组细胞增殖率相比较差异具有统计学意义（P=0.026<0.05）。2.AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示SIIF蛋白作用于THP-1细胞24小时后，实验组细胞早期凋亡率为（11.867±1.604）%，明显高于对照组（5.300±0.265）%，与对照组早期凋亡率相比较差异具有显著性意义（P=0.002<0.01）。3.ConA-FITC/DAPI双染荧光显微镜观察显示，SIIF蛋白所在位置的绿色荧光与DAPI所在细胞核位置的蓝色荧光完全重合，说明SIIF蛋白进入THP-1细胞后结合于细胞核。4.SIIF蛋白经SDS-PAGE分离、胰蛋白酶酶解及液相色谱-串联质谱法分析后，根据蛋白分子量大小、评分及功能综合评价后，我们将分泌型天冬氨酸蛋白酶6（Secretedaspartyl proteinase，Sap6）和Rbt4p（repressed by TUP1protein4）两种蛋白作为SIIF候选蛋白。结论：1.SIIF蛋白能抑制THP-1细胞增殖。2.SIIF蛋白具有诱导THP-1细胞凋亡的活性。3.SIIF蛋白进入THP-1后结合于细胞核，可能通过影响细胞DNA转录，功能蛋白合成受阻，使细胞活性下降，最终细胞发生凋亡。4.Sap6和Rbt4p为候选的SIIF蛋白。