【摘 要】
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杀菌渗透性增强蛋白(BPI)是一种机体内源性的具有强大抗菌活性的阳离子抗菌蛋白,在机体先天防御感染方面具有重要作用。最初是从人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中分离得到,也分
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杀菌渗透性增强蛋白(BPI)是一种机体内源性的具有强大抗菌活性的阳离子抗菌蛋白,在机体先天防御感染方面具有重要作用。最初是从人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中分离得到,也分布于嗜酸性粒细胞的特殊颗粒内及多形核白细胞的表面。它通过与细菌胞壁上脂多糖的高度亲和以及中和内毒素的途径来抑制或者杀死革兰阴性菌。有研究指出,在正常情况下,小鼠睾丸与附睾即有高水平的BPI表达,提示它可能与精子发生及成熟具有一定的关系。研究表明,睾丸中阶段特异性表达和附睾中区域特异性表达的基因与精子发生、精子成熟过程密切相关。本实验旨在进一步观察BPI蛋白基因在睾丸与附睾的表达特性,尤其是它在生后发育中睾丸表达的时空规律以及它在附睾表达的区域特异性,为进一步探讨其在生殖活动中的可能作用提供线索。 本研究首先经RT-PCR显示,BPImRNA在小鼠睾丸与附睾高表达,且只表达于附睾头部。在前列腺、精囊腺和凝固腺未见表达。在生后发育过程中,BPI mRNA的表达水平随着增龄而升高,至性成熟期(60d)时达到峰值,提示BPI mRNA的表达可能呈雄激素依赖方式。 我们经原核重组表达、亲和层析纯化了BPI-N端蛋白,并获得抗BPI-N兔多克隆抗体。以其为一抗经蛋白免疫荧光染色后发现,BPI蛋白局限表达于附睾头近体部上皮细胞并可附着在精子头部项体区质膜上;并且BPI也可位于顶体内,在诱发项体反应后得以暴露;还有一部分发生了顶体反应的精子可能因BPI蛋白被释放或者被降解而无阳性荧光。这些发现提示,分布于精子的BPI蛋白可能会因其所在部位不同而在精子成熟和受精过程中的精-卵识别等不同阶段中发挥不同的作用。 溶脲脲原体(UU)感染可以导致男性不育。流行病学调查表明,在UU感染的部分男性不育患者血清和精液中出现抗精子抗体,并可能因此而导致不育。我们利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统重组表达并纯化获得了BPI融合蛋白,发现该蛋白可以抑制UU生长,这也为临床上因UU感染导致不育的患者提供了新的用药方案。
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