论文部分内容阅读
研究背景及目的： 在人体，除了大脑之外，肝脏是另一个尚未完全被认识的器官，其结构非常细微，功能异常复杂，正因为如此，许多疾病发生在肝脏，并且目前的众多治疗手段仍对一些肝脏疾病束手无策，如晚期肝硬化、先天性肝病、爆发性肝炎、肝癌等。肝移植的问世与发展无疑扩展了肝脏治疗的范畴及领域、推动了肝脏外科技术的发展。随着新的免疫抑制剂的问世、手术和监护等技术的提高，肝移植取得了很大进展，成为治疗终末期肝病常规和有效方法。这意味着过去内科无法治疗的一些先天性肝脏代谢性疾病和终末期肝病有望被治愈或使病人延长生命。然而由于各种因素导致的器官短缺是目前我国肝移植领域面临的尴尬问题之一，心脏死亡后器官捐赠(DCD)为拓展器官来源有着重要意义，然而DCD肝脏器官存在热缺血时间长，损伤大，器官质量得不到保证等问题。 热休克蛋白(Hsps)是一组主要存在于细胞内结构高度保守的蛋白质分子家族，具有抗炎、抗细胞凋亡和减轻过氧化作用，对移植器官保存和缺血再灌注损伤发挥自身保护作用，其中Hsp70是含量最丰富、最主要、作用最突出的一类成员。Hsp70适当的表达可减轻炎症反应，减少细胞凋亡。稳定蛋白质结构，降低肝脏组织缺血再灌注损伤的程度。 本实验主要为测定Hsp70在大鼠肝移植不同阶段的表达并探讨缺血预处理对Hsp70表达及大鼠DCD移植肝的影响。 方法： 利用Kamada“二袖套法”为实验方法建立大鼠原位肝移植模型，将SD雄性大鼠随机分为3组:1、假手术组(n=20);2、DCD肝移植组(n=40，热缺血时间为20min);3、缺血预处理(IP)肝移植组（n=40，进行缺血预处理，即夹闭肝门15min后开放，关腹后24h行DCD移植，热缺血时间为20min），分别取移植后2h、4h、6h、12h肝组织样品及静脉血，用组织病理切片H&E染色观察肝移植再灌注后移植肝的损伤情况，检测血清中ALT水平来评估移植肝肝功能，采用荧光定量RT-PCR检测移植物中Hsp70mRNA转录水平及Western-blot法测定Hsp70蛋白表达情况，对比缺血预处理组和DCD肝移植组各时间点大鼠肝脏组织Hsp70的表达。 结果： 1、移植后肝组织病理观察:肝移植再灌注后肝脏小叶结构开始破坏，出现出血、炎性细胞浸润、水肿、脂肪变性、细胞皱缩核分裂甚至坏死、凋亡。且随着时间推移（2h-12h），肝脏损伤显著增加。缺血预处理组肝移植后肝脏损伤在各时间点较DCD肝移植组损伤延后且程度更轻。 2、肝移植再灌注后血清ALT水平，与假手术组相比，缺血预处理组、DCD组和正常肝移植组大鼠血清ALT水平在移植后、2h、4h、6h及12h均明显升高(P＜0.05)且呈递增趋势;与缺血预处理组相比，DCD肝移植组各时间点血清中ALT水平显著升高(P＜0.05);与DCD肝移植组各时间点血清中ALT水平相比显著升高(P＜0.05)。 3、Hsp70 mRNA转录在肝移植大鼠中较假手术组明显增加(P＜0.05)，且缺血预处理组较DCD肝移植组转录显著增加(P＜0.05)。 4、Hsp70蛋白半定量测定在肝移植大鼠中较假手术组明显增加(P＜0.05)，且缺血预处理组较DCD肝移植组转录显著增加(P＜0.05)。 结论： 1、Hsp70参与了大鼠DCD肝移植术后肝脏缺血再灌注损伤过程; 2、Hsp70在大鼠DCD肝移植术后肝组织中表达随时间推移表达呈增高趋势; 3、Hsp70对大鼠DCD移植肝起到了一定保护作用。