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第一部分:乌司他丁对兔急性百草枯中毒心肌损伤的保护作用
目的:
探讨乌司他丁(UTI)对急性百草枯中毒所致兔心肌损伤的保护作用及机制。
方法:
将24只健康日本大耳白兔按随机数字表法分为对照组,模型组(腹腔注射百草枯37 mg/kg1次),UTI低和高剂量组(染毒前1周开始分别静脉注射UTI25kU·kg-1·d-1、50 kU·kg-2·d-1,共9d)4组。于末次给药后24h称重并处死动物,取左心室组织,测定羟脯氨酸(HYP)的含量:用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)监测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP-2)转录水平;行免疫组化染色,观察心肌形态学及MMP-2蛋白表达。
结果:
与对照组相比,模型组心肌HYP含量(μg/mg)明显增高(3.85±0.36比2.52±0.29,P＜0.05):心肌细胞MMP-2 mRNA表达及免疫组化评分(分)明显增高(2.07±0.57比1.00±0.35,2.24±0.82比1.40±0.62,均P＜0.05),同时TIMP-2呈下降趋势(0.78±0.24比1.00±0.17,P＞0.05);组织形态学显示心肌排列紊乱。与模型组相比,UTI低、高剂量组心肌HYP含量降低(3.40±0.48、3.12±0.43比3.85±0.36,P＞0.05和P＜0.05);MMP-2 mRNA表达和免疫组化评分明显降低(mRNA:1.86±0.44、1.58±0.46H52.07±0.57,P＞0.05和P＜0.05;免疫组化评分:1.93±0.86、1.75±0.67比2.24±0.82,均P＜0.05);而TIMP-2 mRNA表达升高,但差异无统计学意义(0.82±0.35、0.94±0.33比0.78±0.24,均P＞0.05);且心肌纤维排列紊乱程度减轻。
结论:
UTI具有改善急性百草枯中毒致心肌功能障碍及心肌间质纤维化的作用,这一作用与其下调MMP-2水平有关。
第二部分:乌司他丁减轻百草枯所致兔心肌氧化应激损伤——自身保护因素在其中的表现
目的:
探讨UTI对兔急性百草枯中毒所致心肌氧化应激损伤的保护作用及机制。
方法:
30只日本大耳白兔随机分配至5组:A组,空白对照;B、C、D、E组均通过腹腔注射总剂量为30mg/kg百草枯,C、D、E三组分别应用15000、30000、50000U/kg乌司他丁(UTI)干预7天。于麻醉中取动物左心室。行HE及4-HNE免疫组化染色,测定组织羟脯氨酸(HYP)含量,应用RT-PCR检测TGF-β1、adiponectin、PPAR-α、AMPK-β1、UCP-1 mRNA水平。
结果:
PQ致心肌排列紊乱,心肌HYP含量增高,4-HNE免疫组化评分增高,TGF-β1转录增多,PPAR-α、AMPK-β1 mRNA水平降低。应用UTI干预后,与PQ模型组相比,心肌HYP含量均降低(all p＜0.05),4-HNE免疫组化评分呈现随UTI剂量增加而下降趋势(all p＜0.01),UTI改善心肌脂质过氧化;且TGF-β1转录水平在UTI干预的D、E两组中显著低于PQ模型组(t=11.024,p＜0.01;t=14.697,p＜0.01)。心肌内PPAR-α及UCP-1两基因转录水平于D组中高于正常组(t=18.708,p＜0.01;T=180,p＜0.01),在E组中增高更为显著(all p＜0.01)。PPAR-α及UCP-1 mRNA水平与UTI剂量存在显著关联性(rs=0.948,p＜0.01;rs=0.802,p＜0.01)。
结论:
UTI具有改善PQ致心肌氧化应激损伤作用,且与UTI抑制TGF-β1、增加PPAR-α、UCP-1水平有关。